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水稻(Oryza sativa L.)光呼吸突变体线粒体丝氨酸羟甲基转移酶基因克隆及功能分析

缩略词第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-13页
第一章 前言第13-28页
 1 光呼吸研究进展第13-25页
   ·植物光呼吸途径第13-15页
   ·C_4植物的光呼吸第15-16页
   ·光呼吸的功能第16-21页
     ·光呼吸的光保护作用第17-19页
       ·光抑制和光氧化第17页
       ·光呼吸减轻光抑制和光氧化第17-19页
     ·光呼吸途径参与抗逆反应第19-21页
   ·光呼吸突变体筛选及基因克隆第21-23页
   ·对C_3植物光呼吸的调控和改造第23-25页
     ·C_3植物的基因工程改造第23-25页
       ·C_3植物的C_4途径改造第23-24页
       ·改变磷酸乙醇酸代谢途径第24-25页
 2 丝氨酸羟甲基转移酶研究进展第25-27页
   ·丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)催化的生化反应第25-26页
   ·编码SHMT的基因第26-27页
 3 本研究目的与意义第27-28页
第二章 OsmSHMT突变体表型及基因克隆第28-56页
 1 材料与方法第28-42页
   ·材料第28-29页
     ·植物材料第28页
     ·主要试剂第28页
     ·载体和菌株第28-29页
   ·方法第29-42页
     ·材料培养第29页
     ·色素含量测定第29页
     ·水稻叶片GUS染色第29-30页
     ·基因组DNA提取第30页
     ·T-DNA插入潮霉素抗性基因PCR鉴定第30-31页
     ·T-DNA插入位点侧翼序列分离第31-33页
     ·PCR产物测序第33-34页
     ·PCR验证预测基因(OsSHMT)与突变表型共分离第34-35页
     ·RT-PCR检测OsmSHMT在突变体中的表达第35-36页
     ·转基因互补回复第36-40页
     ·水稻遗传转化第40-42页
 2 结果第42-55页
   ·水稻线粒体丝氨酸羟甲基转移酶(OsmSHMT)突变体表型第42-43页
   ·蔗糖能恢复突变体正常生长第43-44页
   ·突变基因克隆第44-55页
     ·突变表型与T-DNA插入共分离第44页
     ·T-DNA插入位点侧翼序列分离第44-46页
     ·突变体中Os03g0738400基因的表达第46-47页
     ·基因编码蛋白分析第47-48页
     ·疏水性和跨膜区分析第48页
     ·蛋白功能位点和结构功能域分析第48-50页
     ·基因功能互补验证第50-55页
       ·互补载体构建第51-52页
       ·水稻转化第52-54页
       ·转基因互补植株鉴定第54-55页
 3 小结第55-56页
第三章 OsmSHMT基因生物学功能研究第56-72页
 1 材料与方法第56-60页
   ·植物材料第56-57页
     ·主要试剂第56页
     ·载体和菌株第56-57页
   ·方法第57-60页
     ·突变体高C02浓度培养第57页
     ·GUS染色第57页
     ·叶绿体电镜切片第57-58页
     ·叶绿体类囊体膜蛋白蓝绿温和胶电泳第58页
     ·OsmSHMT编码蛋白原核表达第58-60页
       ·OsmSHMT-pET28a载体构建第58-59页
       ·蛋白诱导表达第59-60页
     ·叶绿素荧光测定第60页
 2 结果第60-70页
   ·OsmSHMT基因组织器官表达模式第60-61页
   ·OsmSHMT基因编码产物原核表达第61-64页
   ·高CO_2浓度下突变体生长状况第64-65页
   ·OsmSHMT突变对植株光合功能的影响第65-70页
     ·叶绿体超微结构变化第65-66页
     ·类囊体膜蛋白复合物变化第66-67页
     ·突变体叶绿素慢诱导荧光变化第67-70页
 3 小结第70-72页
讨论第72-76页
 1 增强子捕获载体提高水稻基因克隆效率第72页
 2 OsmSHMT基因表达模式第72-73页
 3 OsmSHMT突变体叶绿素缺失表型由光氧化造成第73-74页
 4 OsmSHMT突变体非光化学淬灭降低由类囊体膜通透性变化造成第74页
 5 OsmSHMT基因突变影响植株生长速率第74-76页
参考文献第76-83页
博士期间发表论文第83-84页
致谢第84页

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