单核增生李斯特氏菌适体的筛选、结构分析与特异性的研究
| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 绪论 | 第11-27页 |
| 第一章 用SELEX法筛选单核增生李斯特氏菌适体 | 第27-43页 |
| ·前言 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-33页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·随机ssDNA文库、引物 | 第27页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·溶液 | 第28页 |
| ·其它试剂 | 第28-29页 |
| ·实验用仪器 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-33页 |
| ·菌的制备 | 第30页 |
| ·文库与引物的稀释 | 第30页 |
| ·SELEX筛选过程 | 第30-31页 |
| ·PCR优化反应体系及反应条件 | 第31页 |
| ·PCR扩增反应条件 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增产物纯化 | 第32页 |
| ·ssDNA次级文库的制备 | 第32-33页 |
| ·筛选ssDNA与单核增生李斯特氏菌结合率的测定 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-37页 |
| ·每轮PCR优化反应的最佳退火温度 | 第33-34页 |
| ·每轮PCR优化反应的电泳结果 | 第34-36页 |
| ·SELEX筛选结果 | 第36页 |
| ·筛选的ssDNA与单核增生李斯特氏菌的结合率 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-42页 |
| ·筛选对象的选择 | 第37-38页 |
| ·随机ssDNA文库与引物的设计 | 第38页 |
| ·文库用量对筛选结果的影响 | 第38-39页 |
| ·靶分子浓度对筛选结果的影响 | 第39页 |
| ·反向筛选的利用对筛选结果的影响 | 第39页 |
| ·适体分离方法对筛选结果的影响 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增条件的优化对筛选结果的影响 | 第40-41页 |
| ·扩增产物的回收对筛选结果的影响 | 第41页 |
| ·筛选轮数对筛选结果的影响 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第二章 适体的克隆、测序 | 第43-65页 |
| ·前言 | 第43页 |
| ·材料与方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·克隆相关试剂 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·第14轮筛选产物的扩增和回收纯化 | 第44-45页 |
| ·PCR纯化产物的连接 | 第45页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·转化 | 第45页 |
| ·平板的制作及转化菌的涂布 | 第45-46页 |
| ·筛选转化子 | 第46页 |
| ·克隆子的鉴定 | 第46页 |
| ·测序 | 第46页 |
| ·适体序列结构分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-61页 |
| ·克隆菌蓝白斑筛选结果 | 第46-47页 |
| ·克隆子PCR扩增产物电泳结果 | 第47-48页 |
| ·适体的测序峰图 | 第48-55页 |
| ·适体的一级结构分析 | 第55-56页 |
| ·适体的二级结构分析 | 第56-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·适体的克隆 | 第61-62页 |
| ·克隆子的挑选与鉴定 | 第62页 |
| ·适体的一级结构 | 第62页 |
| ·适体的二级结构 | 第62-63页 |
| ·最佳核心适体 | 第63页 |
| ·小结 | 第63-65页 |
| 第三章 适体与单核增生李斯特氏菌结合率的测定 | 第65-71页 |
| ·前言 | 第65页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-66页 |
| ·各克隆子DNA的提取 | 第65页 |
| ·地高辛标记的ssDNA的制备 | 第65-66页 |
| ·各适体与单核增生李斯特氏菌结合率的测定 | 第66页 |
| ·B09号适体特异性的测定 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-67页 |
| ·各适体与单核增生李斯特氏菌的结合率 | 第66-67页 |
| ·B09号适体特异性的测定 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-70页 |
| ·适体与单核增生李斯特氏菌的结合率的测定 | 第67-68页 |
| ·结合率及特异性测定的影响因素 | 第68-69页 |
| ·B09号适体的特异性 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第四章 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 个人简历 | 第85-87页 |
