中文摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-13页 |
引言 | 第13页 |
第一章 文献综述 | 第13-24页 |
1 不同物种Mx 基因的发现及其命名 | 第13-15页 |
·Mx 基因的发现 | 第13-14页 |
·其他哺乳动物Mx 蛋白的发现 | 第14-15页 |
·鱼类Mx 蛋白的发现 | 第15页 |
·禽类Mx 基因的发现 | 第15页 |
2 Mx 蛋白的结构 | 第15-17页 |
3 Mx 蛋白的诱导表达调控机理 | 第17-19页 |
4 Mx 蛋白的表达定位、功能 | 第19-20页 |
5 Mx 蛋白的抗病毒机理 | 第20-21页 |
6 Mx 基因多态性与抗病活性的关系 | 第21-22页 |
7 Mx 基因在抗病育种中的研究展望 | 第22-24页 |
第二篇 试验研究 | 第24-60页 |
实验一 鸡Mx 基因在E.coli 的表达、纯化及其鉴定 | 第24-38页 |
1 材料和方法 | 第24-31页 |
·材料与试剂 | 第24-26页 |
·方法 | 第26-31页 |
2 结果与分析 | 第31-35页 |
·基因克隆 | 第31页 |
·稀有密码子统计分析结果 | 第31-32页 |
·Mx 基因的T-A 克隆鉴定 | 第32页 |
·重组原核表达载体鉴定结果 | 第32-33页 |
·重组质粒外源蛋白的诱导表达 | 第33页 |
·表达条件的优化分析 | 第33-35页 |
·表达产物纯化和电泳鉴定 | 第35页 |
3 讨论 | 第35-38页 |
·原核表达系统 | 第35-36页 |
·稀有密码子对外源基因在大肠杆菌中表达的影响 | 第36-38页 |
实验二 鸡抗病毒蛋白 Mx 基因在毕赤酵母 GS115 中的表达 | 第38-44页 |
1 材料和方法 | 第38-40页 |
·材料 | 第38-39页 |
·方法 | 第39-40页 |
2 结果 | 第40-43页 |
·鸡抗病毒蛋白Mx 基因的克隆 | 第40-41页 |
·重组载体pMD-Mx 的构建与鉴定 | 第41页 |
·重组穿梭质粒pPIC9K-Mx 的构建与鉴定 | 第41-42页 |
·重组酵母菌株的筛选 | 第42页 |
·诱导表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第42-43页 |
3 讨论 | 第43-44页 |
实验三 真核表达载体 pIRES2-EGFP-Mx 的构建及其在 293 细 胞内的表达研究 | 第44-53页 |
1 材料和方法 | 第44-48页 |
·材料 | 第44-45页 |
·方法 | 第45-48页 |
2 结果 | 第48-51页 |
·目的基因的克隆 | 第48页 |
·pIRES2-EGFP-Mx 的构建鉴定结果 | 第48-49页 |
·多聚乙烯亚胺介导质粒对293 细胞的瞬时转染 | 第49-50页 |
·目的基因在293 细胞中的表达检测 | 第50-51页 |
3 讨论 | 第51-53页 |
实验四 基因免疫制备鸡 Mx 基因抗体血清及其初步应用 | 第53-60页 |
1 材料和方法 | 第53-56页 |
·材料 | 第53-54页 |
·方法 | 第54-55页 |
·细胞转染 | 第55页 |
·转染pcDNA3.0-MMx 后NIH-3T3 的筛选 | 第55页 |
·RT-PCR 检测Mx 的表达 | 第55-56页 |
·IFA 检测抗体血清 | 第56页 |
2 结果 | 第56-58页 |
·真核表达载体的鉴定结果 | 第56页 |
·RT-PCR 检测Mx 蛋白在3T3 细胞中的表达 | 第56-57页 |
·IFA 检测抗血清效价 | 第57-58页 |
3 讨论 | 第58-60页 |
全文结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-69页 |
致谢 | 第69-70页 |
硕士期间发表的论文 | 第70页 |