| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 引言 | 第21-23页 |
| 第Ⅰ部分 心血瘀阻证微环境的研究背景 | 第23-35页 |
| 1 微环境的概念、特点及其学术趋势 | 第23-27页 |
| 2 中医学对微环境的认识 | 第27-28页 |
| 3 微环境的界定与模式 | 第28-29页 |
| 4 心血瘀阻证微环境研究的现状分析 | 第29-30页 |
| 5 心肌微环境对干细胞的动员和分化作用 | 第30-32页 |
| 6 改善心肌微环境对干细胞向心肌细胞分化的影响 | 第32-33页 |
| 7 BMSCs向心肌样细胞分化的机制研究 | 第33-34页 |
| 8 中医药在BMSCs向心肌样细胞分化研究概况 | 第34-35页 |
| 第Ⅱ部分 心血瘀阻证微环境对BMSCs移植的影响及其MMP-2、MMP-9、PI3K和p38信号转导通路变化的实验研究 | 第35-64页 |
| 1 材料与方法 | 第36-48页 |
| ·试验流程 | 第36-37页 |
| ·动物 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·主要试剂配制 | 第38-40页 |
| ·细胞培养用液 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR主要试剂配制 | 第39页 |
| ·western-blots主要试剂配制 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·大鼠心血瘀阻证模型制备 | 第41-42页 |
| ·大鼠急性心肌梗死(AMI)模型制备 | 第41-42页 |
| ·大鼠血液流变学检测 | 第42页 |
| ·大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定 | 第42-43页 |
| ·BMSCs的分离与培养 | 第42页 |
| ·BMSCs的传代及纯化 | 第42-43页 |
| ·BMSCs的鉴定 | 第43页 |
| ·BMSCs细胞计数 | 第43页 |
| ·大鼠BMSCs标记及细胞悬液配制 | 第43页 |
| ·动物分组 | 第43-45页 |
| ·检测指标与方法 | 第45-48页 |
| ·MMP-2、MMP-9酶联免疫吸附法检测 | 第45页 |
| ·p-Akt及p-p38信号转导蛋白Western-blots检测 | 第45-46页 |
| ·心肌Desmin-Brdu、MHC-Brdu双染的表达 | 第46-47页 |
| ·心脏转录因子GATA-4 mRNA的表达 | 第47-48页 |
| ·统计学处理 | 第48页 |
| 2 实验结果 | 第48-55页 |
| ·大鼠一般情况 | 第48-49页 |
| ·心肌梗死心血瘀阻证模型的建立 | 第49-50页 |
| ·急性心肌梗死模型心电图改变 | 第49页 |
| ·血液流变学指标结果 | 第49-50页 |
| ·病理组织学结果 | 第50页 |
| ·BMSCs的培养纯化情况 | 第50页 |
| ·BMSCs表面抗原的鉴定 | 第50-51页 |
| ·BMSCs移植心血瘀阻证心肌后Desmin-Brdu的表达 | 第51页 |
| ·BMSCs移植心血瘀阻证心肌后MHC-Brdu的表达 | 第51页 |
| ·BMSCs移植心血瘀阻证心肌后心脏早发育基因GATA-4 mRNA的表达 | 第51-52页 |
| ·RNA的鉴定 | 第51-52页 |
| ·BMSCs移植心血瘀阻证心肌后对GATA-4 mRNA表达的影响 | 第52页 |
| ·各组心肌组织MMP-2的表达 | 第52页 |
| ·各组心肌组织MMP-9的表达 | 第52-53页 |
| ·各组心肌组织中p-Akt及p-p38信号转导蛋白的表达 | 第53-54页 |
| ·PI3K信号转导通路中p-Akt蛋白的表达 | 第53-54页 |
| ·p38信号转导通路中p-p38蛋白的表达 | 第54页 |
| ·BMSCs移植后各组GATA-4 mRNA含量与MMP-2、MMP-9、p-Akt、p-p38关联性分析 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-63页 |
| ·BMSCs移植于心血瘀阻证心肌向心肌内的迁移及分化 | 第55-60页 |
| ·BMSCs的分离及纯化 | 第56-57页 |
| ·心梗心血瘀阻证模型的选择及标准化 | 第57页 |
| ·Brdu标记移植的BMSCs在宿主心肌中的定位 | 第57-58页 |
| ·BMSCs移植于心血瘀阻证心肌Desmin-Brdu、MHC-Brdu双染的表达 | 第58-59页 |
| ·BMSCs移植于心血瘀阻证心肌心脏转录因子GATA-4 mRNA的表达 | 第59-60页 |
| ·心梗心血瘀阻证心肌微环境对BMSCs向心肌样细胞分化的机制 | 第60-63页 |
| ·心梗心血瘀阻证心肌微环境MMP-2、MMP-9的变化 | 第60-62页 |
| ·心梗心血瘀阻证心肌微环境PI3K及p38信号转导通路的变化 | 第62-63页 |
| 4 结论 | 第63-64页 |
| 第Ⅲ部分 养心通脉有效部位方对BMSCs移植于心梗心血瘀阻证心肌存活及其微环境变化机制的实验研究 | 第64-77页 |
| 1 材料与方法 | 第65-67页 |
| ·操作流程 | 第65页 |
| ·动物 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要试剂配制 | 第65-66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定 | 第66页 |
| ·大鼠BMSCs标记及细胞悬液配制 | 第66页 |
| ·大鼠心血瘀阻证模型制备 | 第66页 |
| ·实验动物分组 | 第66页 |
| ·检测指标与方法 | 第66-67页 |
| ·心肌Desmin-Brdu、MHC-Brdu蛋白免疫组织化学双染 | 第66页 |
| ·心脏转录因子GATA-4 mRNA RT-PCR检测 | 第66页 |
| ·MMP-2、MMP-9酶联免疫吸附法检测 | 第66-67页 |
| ·p-Akt及p-p38信号转导蛋白Western-Blots检测 | 第67页 |
| ·统计学处理 | 第67页 |
| 2 结果 | 第67-71页 |
| ·大鼠一般情况资料 | 第67页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后Desmin-Brdu、MHC-Brdu表达的影响 | 第67-69页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后Desmin-Brdu表达的影响 | 第67-68页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后MHC-Brdu表达的影响 | 第68-69页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后GATA-4 mRNA表达的影响 | 第69页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后MMP-2、MMP-9表达影响 | 第69-70页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后p-Akt和p-p38表达的影响 | 第70页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后p-Akt表达的影响 | 第70页 |
| ·apr-YTF对BMSCs移植后p-p38表达的影响 | 第70页 |
| ·GATA-4 mRNA含量与MMP-2、MMP-9、p-Akt、p-p38关联性分析 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-76页 |
| ·apr-YTF的研究现状 | 第71-72页 |
| ·apr-YTF对BMSCs存活和向心肌方向转化的影响 | 第72-74页 |
| ·apr-YTF干预BMSCs向心肌样分化的微环境机制 | 第74-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 第Ⅳ部分 体外模拟心血瘀阻证微环境对BMSCs向心肌样细胞分化及养心通脉有效部位方干预作用的实验研究 | 第77-100页 |
| 1 材料与方法 | 第77-84页 |
| ·试验流程 | 第77-78页 |
| ·动物 | 第78页 |
| ·主要试剂 | 第78页 |
| ·主要试剂配制 | 第78-79页 |
| ·主要仪器 | 第79页 |
| ·BMSCs的分离与培养 | 第79页 |
| ·BMSCs的传代及纯化 | 第79页 |
| ·BMSCs的鉴定 | 第79页 |
| ·BMSCs细胞计数 | 第79页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境的制备 | 第79-80页 |
| ·心血瘀阻证大鼠模型血清及心肌组织液制备 | 第79页 |
| ·MTT法测定血清组织混合液对BMSCs生长抑制率 | 第79-80页 |
| ·MTT法测定apr-YTF对BMSCs生长抑制率 | 第80-81页 |
| ·试验药物apr-YTF的制备 | 第80页 |
| ·apr-YTF对BMSCs无毒剂量 | 第80-81页 |
| ·apr-YTF对BMSCs增殖的影响 | 第81页 |
| ·心血瘀阻证微环境及apr-YTF对BMSCs的诱导分化 | 第81-82页 |
| ·检测指标 | 第82-84页 |
| ·Desmin、MHC免疫细胞化学鉴定 | 第82-83页 |
| ·制作细胞爬片 | 第82页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第82-83页 |
| ·结果判定方法 | 第83页 |
| ·心肌转录因子GATA-4 mRNA RT-PCR鉴定 | 第83页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第83页 |
| ·mRNA的反转录 | 第83页 |
| ·反转录产物扩增 | 第83页 |
| ·PCR产物电泳鉴定 | 第83页 |
| ·p-Akt及p-p38信号转导蛋白Western-Blots检测 | 第83-84页 |
| ·统计学处理 | 第84页 |
| 2 结果 | 第84-92页 |
| ·BMSCs分离、培养及鉴定 | 第84页 |
| ·大鼠血清组织混合液对BMSCs的细胞毒性 | 第84页 |
| ·apr-YTF对BMSCs的抑制率及对增殖的影响 | 第84-86页 |
| ·诱导后BMSCs形态变化 | 第86-87页 |
| ·诱导后BMSCs Desmin及MHC表达的免疫组化结果 | 第87-88页 |
| ·诱导后的BMSCs心肌转录因子GATA-4 mRNA RT-PCR检测结果 | 第88页 |
| ·诱导后BMSCs培养液中MMP-2、MMP-9的表达 | 第88-89页 |
| ·诱导后的BMSCs p-Akt和p-p38蛋白Western-blots检测结果 | 第89页 |
| ·心肌样分化标志物与MMP-2、MMP-9、p-Akt、p-p38关联性分析 | 第89-92页 |
| 3 讨论 | 第92-99页 |
| ·体外心血瘀阻证微环境的模拟 | 第92-93页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境不同浓度血清组织液对BMSCs的最大有效浓度 | 第93-94页 |
| ·不同梯度浓度的apr-YTF对BMSCs的最大无毒浓度及其增殖作用 | 第94-95页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境对BMSCs向心肌样的分化的影响 | 第95-97页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境心肌结蛋白Desmin及肌球蛋白MHC的变化 | 第95-96页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境心脏肌转录因子GATA-4 mRNA的变化 | 第96-97页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境变化机制的研究 | 第97-99页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境中MMP-2、MMP-9的表达 | 第97-98页 |
| ·体外模拟心血瘀阻证微环境PI3K及p38信号转导通路的变化 | 第98-99页 |
| 4 结论 | 第99-100页 |
| 全文总结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 附录1 文献综述 | 第116-123页 |
| 附录2 攻读博士学位期间发表论文和参与科研项目目录 | 第123-124页 |
