| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第14-30页 |
| 1.1 乳腺癌简介 | 第14页 |
| 1.1.1 乳腺癌的发展 | 第14页 |
| 1.1.2 乳腺癌的治疗 | 第14页 |
| 1.2 Rab 蛋白 | 第14-18页 |
| 1.2.1 Rab蛋白简介 | 第14-16页 |
| 1.2.2 Rab蛋白与囊泡运输 | 第16-18页 |
| 1.2.3 Rab蛋白与疾病发生 | 第18页 |
| 1.3 Rab34 蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.1 Rab34蛋白简介 | 第18-19页 |
| 1.3.2 Rab34研究进展 | 第19页 |
| 1.4 RILP | 第19-21页 |
| 1.5 模式生物斑马鱼 | 第21-24页 |
| 1.5.1 斑马鱼简介 | 第21页 |
| 1.5.2 斑马鱼发育时期简介 | 第21-23页 |
| 1.5.3 斑马鱼的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.6 CRISPR/cas9基因编辑技术 | 第24-27页 |
| 1.6.1 CRISPR/Cas9 系统简介 | 第24页 |
| 1.6.2 CRISPR/Cas9 系统原理 | 第24-26页 |
| 1.6.3 CRISPR/Cas9 的应用 | 第26-27页 |
| 1.7 细胞迁移与EMT | 第27-28页 |
| 1.8 本研究的内容和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-56页 |
| 2.1 材料 | 第30-37页 |
| 2.1.1 常用的材料 | 第30-32页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第32-33页 |
| 2.1.3 试剂药品与耗材 | 第33-35页 |
| 2.1.4 常用溶液组分 | 第35-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-56页 |
| 2.2.1 斑马鱼的胚胎收集及固定 | 第37页 |
| 2.2.2 斑马鱼原位杂交 | 第37-40页 |
| 2.2.3 斑马鱼整体荧光染色 | 第40-41页 |
| 2.2.4 显微注射技术 | 第41-43页 |
| 2.2.5 活体显微拍照 | 第43页 |
| 2.2.6 斑马鱼 Western Blotting样品制备 | 第43页 |
| 2.2.7 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第43-46页 |
| 2.2.8 靶位点突变检测 | 第46-47页 |
| 2.2.9 斑马鱼肿瘤细胞移植实验 | 第47页 |
| 2.2.10 裸鼠肿瘤细胞移植实验 | 第47-48页 |
| 2.2.11 构建表达载体 | 第48-51页 |
| 2.2.12 斑马鱼cDNA制备 | 第51-52页 |
| 2.2.13 细胞培养 | 第52-54页 |
| 2.2.14 细胞免疫荧光实验 | 第54页 |
| 2.2.15 SDS-聚丙烯凝胶电泳 | 第54-55页 |
| 2.2.16 免疫印迹 | 第55-56页 |
| 第三章 结果与分析 | 第56-88页 |
| 3.1 Rab34的序列比对分析 | 第56-57页 |
| 3.2 Rab34在细胞内的定位研究 | 第57-60页 |
| 3.2.1 hRab34在细胞内的定位分析 | 第57-58页 |
| 3.2.2 zRab34在细胞内的定位分析 | 第58-60页 |
| 3.3 zRa b34a原位表达图谱分析 | 第60-61页 |
| 3.4 斑马鱼早期胚胎过表达zRab34a mRNA的表型分析 | 第61-63页 |
| 3.5 斑马鱼CRISPR/cas9敲除试验 | 第63-70页 |
| 3.5.1 靶位点的确定 | 第64页 |
| 3.5.2 靶位点在斑马鱼中存在且无突变发生 | 第64-65页 |
| 3.5.3 sgRNA的构建 | 第65-67页 |
| 3.5.4 靶点有效性检测 | 第67-70页 |
| 3.6 敲除斑马鱼zRab34a纯合品系的建立 | 第70-78页 |
| 3.6.1 建立纯合品系的技术路线 | 第70-71页 |
| 3.6.2 F0代的选择及遗传检测 | 第71-73页 |
| 3.6.3 F1代成鱼敲除形式的确定 | 第73-75页 |
| 3.6.4 F1代的扩大繁殖 | 第75-76页 |
| 3.6.5 纯合品系的确定 | 第76-78页 |
| 3.7 敲除基因zRab34a对斑马鱼发育的影响 | 第78-79页 |
| 3.8 zRa b34a 影响斑马鱼体轴与体节的发育 | 第79-80页 |
| 3.9 zRa b34a 影响斑马鱼原肠运动 | 第80-82页 |
| 3.10 过表达Rab34 的下游效应因子RILP对斑马鱼发育的影响 | 第82-84页 |
| 3.11 敲低hRab34 对乳腺癌细胞迁移/侵袭的影响 | 第84-87页 |
| 3.11.1 斑马鱼体内肿瘤细胞移植分析 | 第84-85页 |
| 3.11.2 裸鼠肺体内肺转移分析 | 第85-87页 |
| 3.12 zRa b34a 对EMT标记物E-cadhe rin的影响 | 第87-88页 |
| 第四章 讨论 | 第88-90页 |
| 第五章 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
