| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-28页 |
| 1.1 前言 | 第13页 |
| 1.2 食物过敏概述 | 第13-18页 |
| 1.2.1 食物过敏流行病学特点 | 第13-14页 |
| 1.2.2 口服耐受与食物过敏 | 第14-18页 |
| 1.3 肠道菌群(共生菌)调节食物过敏 | 第18-21页 |
| 1.3.1 肠道菌群与食物过敏之间的联系 | 第18-19页 |
| 1.3.2 肠道菌群调控食物过敏的相关机理 | 第19-21页 |
| 1.4 益生菌治疗食物过敏 | 第21-24页 |
| 1.5 本课题主要研究内容及意义 | 第24-28页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第24-25页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第25-27页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 活性霍乱毒素B亚基及霍乱毒素B亚基-原肌球蛋白融合蛋白的原核重组表达 | 第28-45页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.3.1 质粒扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.2 提取质粒 | 第31-32页 |
| 2.3.3 高保真PCR扩增目的基因CTB序列(含目的质粒插入点同源序列) | 第32-34页 |
| 2.3.4 目的载体质粒线性化 | 第34页 |
| 2.3.5 PCR扩增产物和目的载体进行同源重组 | 第34-35页 |
| 2.3.6 重组蛋白在E.coli BL21中少量表达 | 第35-38页 |
| 2.3.7 重组蛋白在E.coli BL21中大量表达 | 第38-39页 |
| 2.3.8 MBP-CTB-EGFP重组蛋白细胞膜穿透能力验证 | 第39页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第39-44页 |
| 2.4.1 pEX-4T-1-MBP-CTB-EGFP-1OHis质粒构建 | 第39-40页 |
| 2.4.2 pEX-4T-1-MBP-CTB-TM-10His质粒构建 | 第40-41页 |
| 2.4.3 pEX-4T-1-MBP-CTB-EGFP-10His质粒原核表达及纯化 | 第41-42页 |
| 2.4.4 pEX-4T-1-MBP-CTB-TM-10His质粒原核表达及纯化 | 第42-43页 |
| 2.4.5 MBP-CTB-EGFP重组蛋白细胞膜穿透能力验证 | 第43-44页 |
| 2.5 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 Balb/c小鼠原肌球蛋白口服致敏及益生菌LcZhang治疗模型的构建以及机理初步探究 | 第45-67页 |
| 3.1 前言 | 第45-46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第46页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-54页 |
| 3.3.1 对虾中原肌球蛋白提取 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Balb/c小鼠口服致敏模型及益生菌干预模型构建 | 第48-49页 |
| 3.3.3 小鼠每周体重变化 | 第49-50页 |
| 3.3.4 小鼠临床过敏症状评分 | 第50页 |
| 3.3.5 小鼠血清中特异性IgE、IgG2a、IgG1测定 | 第50页 |
| 3.3.6 血清中组胺(Histamine)的测定 | 第50-51页 |
| 3.3.7 小鼠肠道不同部位切片HE染色 | 第51-52页 |
| 3.3.8 小鼠小肠部位RNA提取及反转录 | 第52-53页 |
| 3.3.9 qPCR检测小鼠小肠中Tslp、Il33基因mRNA表达量 | 第53-54页 |
| 3.3.10 数据分析 | 第54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-65页 |
| 3.4.1 对虾中TM的纯化及SDS-PAGE分析 | 第54-55页 |
| 3.4.2 小鼠体重变化 | 第55-56页 |
| 3.4.3 小鼠过敏症状评分 | 第56-57页 |
| 3.4.4 小鼠血清中特异性IgE变化 | 第57-58页 |
| 3.4.5 小鼠血清中特异性IgG2a、IgG1变化 | 第58-61页 |
| 3.4.6 小鼠血清中组胺浓度 | 第61页 |
| 3.4.7 小鼠肠道黏膜损伤情况分析 | 第61-65页 |
| 3.5 小结 | 第65-67页 |
| 第四章 益生菌LcZhang维持小鼠T细胞免疫稳态并缓解食物过敏作用研究 | 第67-87页 |
| 4.1 前言 | 第67页 |
| 4.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第67-68页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第68页 |
| 4.3 实验方法 | 第68-72页 |
| 4.3.1 Balb/c小鼠口服致敏模型及益生菌干预模型构建 | 第68页 |
| 4.3.2 小鼠免疫组织单细胞悬液制备 | 第68-69页 |
| 4.3.3 小鼠脾细胞、肠系膜淋巴结细胞体外培养 | 第69页 |
| 4.3.4 小鼠血清、脾细胞及肠系膜淋巴结细胞中多细胞因子测定 | 第69-70页 |
| 4.3.5 小鼠大肠、小肠部位RNA提取及反转录 | 第70-71页 |
| 4.3.6 qPCR测定小鼠大肠、小肠中相关细胞因子及转录因子mRNA表达量 | 第71页 |
| 4.3.7 流式细胞术检测小鼠脾脏、肠系膜淋巴结中T细胞分化 | 第71-72页 |
| 4.3.8 数据分析 | 第72页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第72-85页 |
| 4.4.1 LcZhang对致敏小鼠体内Th2反应的影响 | 第72-78页 |
| 4.4.2 LcZhang对致敏小鼠体内Th1反应的影响 | 第78-81页 |
| 4.4.3 LcZhang对致敏小鼠体内Th17反应的影响 | 第81-85页 |
| 4.5 小结 | 第85-87页 |
| 第五章 LcZhang维持小鼠肠道菌群稳态及免疫耐受性以缓解食物过敏机制研究 | 第87-102页 |
| 5.1 前言 | 第87-88页 |
| 5.2 实验材料 | 第88-89页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第88页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第88-89页 |
| 5.3 实验方法 | 第89-93页 |
| 5.3.1 Balb/c小鼠口服致敏模型及益生菌干预模型构建 | 第89页 |
| 5.3.2 小鼠大肠、小肠部位RNA提取及反转录 | 第89页 |
| 5.3.3 qPCR测定小鼠大肠、小肠中相关细胞因子及转录因子mRNA表达量 | 第89页 |
| 5.3.4 小鼠脾脏、肠系膜淋巴结、派式结细胞表面抗体的流式染色 | 第89-91页 |
| 5.3.5 小鼠脾脏、肠系膜淋巴结、派式结细胞含胞内抗体的流式染色 | 第91-92页 |
| 5.3.6 小鼠肠道内内容物16S rRNA测序 | 第92页 |
| 5.3.7 数据分析 | 第92-93页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第93-101页 |
| 5.4.1 LcZhang对致敏小鼠肠道菌群结构影响分析 | 第93-96页 |
| 5.4.2 小鼠大肠、小肠中免疫耐受相关基因相对表达量分析 | 第96-97页 |
| 5.4.3 LcZhang对脾脏中免疫耐受相关DC细胞亚群的影响 | 第97-98页 |
| 5.4.4 LcZhang对脾脏中免疫耐受相关T细胞亚群的影响 | 第98-100页 |
| 5.4.5 小鼠脾脏中B细胞分化情况分析 | 第100-101页 |
| 5.5 小结 | 第101-102页 |
| 第六章 总结论、创新点及研究展望 | 第102-104页 |
| 6.1 总结论 | 第102-103页 |
| 6.2 创新点 | 第103页 |
| 6.3 研究展望 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-116页 |
| 附录:缩略词及中英文对照表 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 已发表论文 | 第119-120页 |
