| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第6-8页 |
| 第一章 实验材料 | 第8-10页 |
| 1.1 药物和试剂 | 第8页 |
| 1.2 主要仪器 | 第8-9页 |
| 1.3 细胞株 | 第9-10页 |
| 第二章 实验方法 | 第10-21页 |
| 2.1 含有TNF-α基因的PPE3-F35-TNF-α质粒的构建 | 第10-15页 |
| 2.1.1 逆转录聚合酶链反应获取目的基因TNF-α | 第10-11页 |
| 2.1.2 目的基因TNF-α PCR产物及溶瘤腺病毒DNA质粒载体AgeI酶切 | 第11-12页 |
| 2.1.3 TNF-α cDNA与质粒载体PENTER20的连接 | 第12页 |
| 2.1.4 连接产物导入大肠杆菌DH5a | 第12-13页 |
| 2.1.5 重组质粒鉴定 | 第13-14页 |
| 2.1.6 细菌内重组 | 第14页 |
| 2.1.7 PPE3-F35-TNF-α载体鉴定 | 第14-15页 |
| 2.2 溶瘤腺病毒重组及鉴定 | 第15-18页 |
| 2.2.1 293细胞培养 | 第15页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第15-16页 |
| 2.2.3 病毒的收获及浓缩 | 第16页 |
| 2.2.4 PPE3-F35-TNF-α重组病毒鉴定 | 第16-18页 |
| 2.3 增殖型腺病毒PPE3-F35-TNF-α对胃癌细胞的体外杀伤研究 | 第18-20页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第18-19页 |
| 2.3.2 MTT法分析增殖型腺病毒对胃癌细胞的杀伤作用 | 第19页 |
| 2.3.3 双抗体夹心法检测TNF-α的表达量 | 第19-20页 |
| 2.4 统计学方法 | 第20-21页 |
| 第三章 实验结果 | 第21-31页 |
| 3.1 溶瘤腺病毒载体质粒PPE3-F35-TNF-α的构建 | 第21-23页 |
| 3.1.1 TNF-α基因鉴定 | 第21页 |
| 3.1.2 PENTER20载体酶切回收 | 第21-22页 |
| 3.1.3 PENTER20-TNF-α载体的鉴定 | 第22页 |
| 3.1.4 PPE3-F35-TNF-α载体鉴定 | 第22-23页 |
| 3.2 PPE3-F35-TNF-α病毒鉴定 | 第23-26页 |
| 3.2.1 GT154+GT156鉴定hTERT的表达,用W96+W98鉴定HRE+CMV的表达 | 第23-24页 |
| 3.2.2 VT605+VT606鉴定F35fiber的表达,W50+W51鉴定EGFP基因的表达 | 第24-25页 |
| 3.2.3 W85,W86鉴定TNF-α的表达 | 第25页 |
| 3.2.4 病毒滴度测定 | 第25-26页 |
| 3.3 MTT实验结果 | 第26-29页 |
| 3.4 双抗体夹心法检测TNF-α的表达量 | 第29-31页 |
| 讨论 | 第31-34页 |
| 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 综述 | 第38-48页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
