| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 低温胁迫是我国橡胶树种植面临的主要逆境之一 | 第11页 |
| 1.2 植物应答低温胁迫的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 低温对植物的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.2 植物对低温胁迫的应答 | 第12-13页 |
| 1.3 植物的抗寒机制 | 第13-15页 |
| 1.3.1 植物抗寒的生理机制 | 第13-14页 |
| 1.3.2 植物抗寒的分子机制研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.3 热带植物和温带植物抗寒性获得的生理基础存在明显差异 | 第15页 |
| 1.4 转录因子ICE的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.5 酵母双杂交技术的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5.1 酵母双杂交的原理 | 第17-18页 |
| 1.5.2 酵母双杂交技术的优缺点 | 第18页 |
| 1.5.3 酵母双杂交应用 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.7 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-44页 |
| 2.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.2 菌株材料与质粒载体 | 第21-22页 |
| 2.3 培养基 | 第22页 |
| 2.4 其它试剂 | 第22页 |
| 2.5 外施茉莉酸对橡胶树抗寒的影响 | 第22页 |
| 2.6 HbICE家族成员基因的克隆 | 第22-27页 |
| 2.6.1 样品采集 | 第22-23页 |
| 2.6.2 橡胶树树皮总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.6.3 RNA浓度以及完整性的检测 | 第23-24页 |
| 2.6.4 RNA反转录成cDNA | 第24页 |
| 2.6.5 HbICE基因的全长扩增 | 第24-27页 |
| 2.7 橡胶树HbICEs基因的生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.8 HbICEs基因与HbJAZs基因的表达分析 | 第27-31页 |
| 2.8.1 材料采集 | 第28页 |
| 2.8.2 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.8.3 cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| 2.8.4 荧光定量PCR | 第28-31页 |
| 2.9 橡胶树HbICE基因家族成员的亚细胞定位 | 第31-35页 |
| 2.9.1 构建HbICE家族成员基因的融合表达载体 | 第31-34页 |
| 2.9.2 制备及转化农杆菌感受态 | 第34-35页 |
| 2.9.3 农杆菌瞬时表达侵染洋葱表皮细胞 | 第35页 |
| 2.9.4 激光共聚焦显微镜观察绿色荧光亚细胞定位 | 第35页 |
| 2.10 HbICE1,HbICE2,HbICE3,HbICE4,HbICE5蛋白相互之间以及与HbJAZs蛋白之间的相互作用鉴定 | 第35-44页 |
| 2.10.1 诱饵载体和捕获载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.10.2 酵母Y2HGold感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.10.3 酵母转化 | 第39-40页 |
| 2.10.4 诱饵载体菌株的毒性实验和自激活实验 | 第40-41页 |
| 2.10.5 酵母双杂验证HbICE1,HbICE2,HbICE3,HbICE4,HbICE5蛋白相互之间以及与HbJAZs蛋白之间的相互作用 | 第41-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-87页 |
| 3.1 茉莉酸对橡胶树抗寒性的影响 | 第44-45页 |
| 3.2 HbICE基因的克隆及鉴定 | 第45-62页 |
| 3.2.1 HbICE基因全长cDNA序列的克隆 | 第45-51页 |
| 3.2.2 HbICE基因的生物信息学分析 | 第51-59页 |
| 3.2.3 HbICEs基因的亚细胞定位 | 第59-62页 |
| 3.3 HbICE基因和HbJAZ基因的表达分析 | 第62-73页 |
| 3.3.1 RNA质量检测 | 第62-63页 |
| 3.3.2 引物特异性检测 | 第63页 |
| 3.3.3 HbICEs与HbJAZs基因的组织特异性表达 | 第63-65页 |
| 3.3.4 低温条件下HbICE和HbJAZ基因家族成员在热垦501和93-114树叶中的表达分析 | 第65-69页 |
| 3.3.5 HbICE与HbJAZ基因家族成员在热研8-79和PR107原生皮和再生皮中的表达分析 | 第69-73页 |
| 3.4 HbICE互作蛋白的筛选鉴定 | 第73-87页 |
| 3.4.1 HbICE基因家族成员间的互作分析 | 第73-80页 |
| 3.4.2 HbICE基因家族成员与HbJAZ基因家族成员间的互作分析 | 第80-87页 |
| 4 讨论 | 第87-90页 |
| 5 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-98页 |
| 附录 | 第98-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
