| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 稻瘟病菌(MAGNAPORTHE ORYZAE) | 第9-10页 |
| 1.1.1 稻瘟病菌侵染循环 | 第9页 |
| 1.1.2 植物免疫系统PTI与ETI | 第9-10页 |
| 1.2 稻瘟病菌分泌蛋白 | 第10-12页 |
| 1.2.1 稻瘟病菌分泌蛋白组学 | 第10-11页 |
| 1.2.2 稻瘟病菌分泌蛋白转运机制 | 第11页 |
| 1.2.3 稻瘟病菌分泌蛋白的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.3 烟草瞬时表达原理 | 第12-13页 |
| 1.4 稻痕病蔺含有CFEM结构域的分泌蛋白研究现状 | 第13-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 实验载体、菌株、植株 | 第15页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 培养基及抗生素 | 第15-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-28页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第17-18页 |
| 2.2.2 稻瘟病菌基因组DNA提取 | 第18页 |
| 2.2.3 稻瘟病菌基因组RNA提取及cDNA合成 | 第18-19页 |
| 2.2.4 载体构建 | 第19-21页 |
| 2.2.4.1 目的基因扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.4.2 纯化回收目的基因 | 第20页 |
| 2.2.4.3 TA克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.4.4 筛选验证目的基因 | 第21页 |
| 2.2.4.5 测序 | 第21页 |
| 2.2.5 农杆菌转化 | 第21-22页 |
| 2.2.6 烟草注射 | 第22页 |
| 2.2.7 MoCFEMs敲除载体构建 | 第22-24页 |
| 2.2.8 MoCFEM1互补载体的构建 | 第24页 |
| 2.2.9 MoCFEMs过表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.10 质粒与片段的酶切与连接 | 第25-26页 |
| 2.2.11 稻瘟病菌原生质体制备与转化 | 第26-27页 |
| 2.2.12 稻瘟病菌DNA粗提 | 第27页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第27-28页 |
| 2.2.14 转化子的PCR验证 | 第28页 |
| 2.3 稻瘟病菌的表型及致病性分析 | 第28-30页 |
| 2.3.1 稻瘟病菌菌落生长速率测定 | 第28页 |
| 2.3.2 稻瘟病菌产孢量统计 | 第28-29页 |
| 2.3.3 大麦叶片离体接种实验 | 第29页 |
| 2.3.4 水稻活体致病性观察 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-50页 |
| 3.1 MoCFEM基因的分析与克隆 | 第30-32页 |
| 3.2 MoCFEMs蛋白瞬时表达结果分析 | 第32-33页 |
| 3.3 MoCFEM1敲除突变体、过表达转化子的获得与功能分析 | 第33-37页 |
| 3.3.1 MoCFEM1敲除突变体、过表达转化子的获得与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.2 MoCFEM1敲除突变体、过表达转化子菌落生长速率观察 | 第34-36页 |
| 3.3.3 MoCFEM1敲除突变体、过表达菌株致病性分析 | 第36-37页 |
| 3.4 MoCFEM2敲除突变体、过表达转化子的获得与功能分析 | 第37-41页 |
| 3.4.1 MoCFEM2敲除突变体、过表达转化子的获得与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4.2 MoCFEM2敲除突变体、过表达转化子菌丝生长观察 | 第38-40页 |
| 3.4.3 MoCFEM2敲除突变体、过表达菌株致病性分析 | 第40-41页 |
| 3.5 MoCFEM3敲除突变体、过表达转化子的获得与功能分析 | 第41-45页 |
| 3.5.1 MoCFEM3敲除突变体、过表达转化子的获得与鉴定 | 第41-42页 |
| 3.5.2 MoCFEM3敲除突变体、过表达转化子菌落生长观察 | 第42-44页 |
| 3.5.3 MoCFEM3敲除突变体、过表达菌株致病性分析 | 第44-45页 |
| 3.6 MoCFEM4敲除突变体、过表达转化子的获得与功能分析 | 第45-50页 |
| 3.6.1 MoCFEM4敲除突变体、过表达转化子的获得与鉴定 | 第45-46页 |
| 3.6.2 MoCFEM4敲除突变体、过表达转化子菌丝生长观察 | 第46-48页 |
| 3.6.3 MoCFEM4敲除突变体、过表达菌株致病性分析 | 第48-50页 |
| 4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
