| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 地中海拟无枝酸菌概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 地中海拟无枝酸菌的特征 | 第9页 |
| 1.1.2 地中海拟无枝酸菌代谢途径 | 第9-10页 |
| 1.2 利福霉素 | 第10-13页 |
| 1.2.1 利福霉素生物合成前体 | 第10-13页 |
| 1.2.2 利福霉素的作用机理 | 第13页 |
| 1.2.3 利福霉素的育种研究进展 | 第13页 |
| 1.3 研究的背景及内容 | 第13-15页 |
| 1.3.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第14页 |
| 1.3.3 研究的可行性 | 第14-15页 |
| 第二章 构建地中海拟无枝酸菌S-丙二酰转移酶基因失活菌株 | 第15-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-19页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 引物 | 第18页 |
| 2.1.5 培养基与缓冲液 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.2.1 fabD基因的克隆 | 第19-23页 |
| 2.2.2 同源重组载体的构建 | 第23-27页 |
| 2.2.3 地中海拟无枝酸菌感受态的制备 | 第27页 |
| 2.2.4 地中海拟无枝酸菌的转化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 突变菌株的PCR验证 | 第28页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.2.7 地中海拟无枝酸菌的发酵 | 第29-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-39页 |
| 2.3.1 S-丙二酰转移酶基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.2 fabD同源重组载体的构建 | 第31-35页 |
| 2.3.3 fabD失活菌株的PCR验证 | 第35-36页 |
| 2.3.4 fabD相对表达量的测定 | 第36-38页 |
| 2.3.5 菌株的发酵 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 2.4.1 基因同源重组载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.2 地中海拟无枝酸菌的电转化 | 第40页 |
| 2.4.3 菌株改造对利福霉素的影响 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 构建地中海拟无枝酸菌异柠檬酸裂解酶基因失活菌株 | 第43-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.3 培养基 | 第44页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第44页 |
| 3.1.5 引物 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 aceA基因的克隆 | 第44-45页 |
| 3.2.2 同源重组载体的构建 | 第45-48页 |
| 3.2.3 同源重组载体的导入 | 第48页 |
| 3.2.4 突变菌株的验证 | 第48-49页 |
| 3.2.5 菌株的发酵 | 第49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-56页 |
| 3.3.1 异柠檬酸裂解酶（aceA）基因的克隆 | 第49-50页 |
| 3.3.2 aceA同源重组载体的构建 | 第50-53页 |
| 3.3.3 aceA失活菌株的筛选与验证 | 第53-55页 |
| 3.3.4 菌株的发酵 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-57页 |
| 3.4.1 基因敲除 | 第56页 |
| 3.4.2 基因融合 | 第56-57页 |
| 3.4.3 aceA基因失活的影响 | 第57页 |
| 3.5 小结 | 第57-59页 |
| 第四章 结论 | 第59-61页 |
| 4.1 结论 | 第59页 |
| 4.2 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录A | 第67-69页 |
| 附录B | 第69-71页 |
| 攻读学位期间所取得的相关科研成果 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |