| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-22页 |
| ·白血病与甲基化 | 第17-19页 |
| ·MDS | 第19页 |
| ·AML | 第19-20页 |
| ·CML | 第20-22页 |
| 第二章 研究目的、方法、实验方案的设计、意义 | 第22-26页 |
| ·研究目的 | 第22-23页 |
| ·研究方法及技术 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量PCR(RQ-PCR) | 第23页 |
| ·实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP) | 第23-24页 |
| ·引物设计注意要点 | 第24页 |
| ·实验方案的设计 | 第24-25页 |
| ·本研究的意义 | 第25-26页 |
| 第三章 实时定量PCR建立和应用 | 第26-34页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·研究对象 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和RNA、DNA制备 | 第27-28页 |
| ·逆转录 | 第28页 |
| ·RQ-PCR检测PRAME基因表达 | 第28-29页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第29页 |
| ·重组载体构建 | 第29页 |
| ·重组质粒转化 | 第29-30页 |
| ·重组质粒提取 | 第30页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第30-31页 |
| ·RQ-PCR阳性模板的建立 | 第31页 |
| ·统计方法 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-33页 |
| ·测序结果 | 第31页 |
| ·RQ-PCR灵敏度、重复性、特异性和扩增效率 | 第31-32页 |
| ·PRAME基因转录本结果 | 第32页 |
| ·PRAME转录本动态监测结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 实时定量MSP的建立和应用 | 第34-40页 |
| ·材料和仪器 | 第34-35页 |
| ·研究对象 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·引物 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·骨髓单个核细胞分离DNA制备 | 第35页 |
| ·DNA修饰(CpGenomeTM DNA Modification Kit修饰DNA) | 第35页 |
| ·RQ-MSP检测PRAME基因启动子低甲基化 | 第35-36页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第36页 |
| ·重组载体构建 | 第36页 |
| ·重组质粒转化 | 第36页 |
| ·重组质拉提取 | 第36页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第36页 |
| ·RQ-MSP阳性模板制备 | 第36-37页 |
| ·统计 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-39页 |
| ·测序结果 | 第37页 |
| ·RQ-MSP特异性、灵敏度、重复性和扩增效率 | 第37-39页 |
| ·PRAME基因低甲基化检测结果 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 MDS患者中PRAME基因甲基化改变 | 第40-45页 |
| ·材料和仪器 | 第40页 |
| ·病例资料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和RNA、DNA制备 | 第40页 |
| ·逆转录 | 第40页 |
| ·DNA修饰 | 第40-41页 |
| ·PRAME基因低甲基化检测 | 第41页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第41页 |
| ·重组载体构建 | 第41页 |
| ·重组质粒提取 | 第41页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第41页 |
| ·阳性模板建立 | 第41页 |
| ·细胞遗传学检查 | 第41页 |
| ·统计 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-43页 |
| ·MDS患者PRAME RQ-MSP测序结果 | 第41-42页 |
| ·MDS患者中PRAME基因低甲基化 | 第42-43页 |
| ·PRAME基因低甲基化与MDS亚型的关系 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第六章 AML患者中PRAME基因表达与低甲基化 | 第45-52页 |
| ·材料和仪器 | 第45页 |
| ·病例资料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和RNA、DNA制备 | 第45页 |
| ·逆转录 | 第45页 |
| ·DNA修饰 | 第45-46页 |
| ·PRAME基因表达检测 | 第46页 |
| ·PRAME基因低甲基化检测 | 第46页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第46页 |
| ·重组质粒的转化 | 第46页 |
| ·重组载体的构建 | 第46页 |
| ·重组质粒的提取 | 第46页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第46页 |
| ·细胞遗传学检查 | 第46页 |
| ·统计 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·AML患者中PRAME基因表达 | 第47-48页 |
| ·PRAME基因甲低甲基化 | 第48-50页 |
| ·PRAME基因表达与低甲基化的关系 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第七章 CML患者PRAME基因表达与低甲基化 | 第52-58页 |
| ·材料和仪器 | 第52页 |
| ·病例资料5.1.1病例资料 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和RNA、DNA制备 | 第52页 |
| ·逆转录 | 第52页 |
| ·DNA修饰 | 第52-53页 |
| ·CML患者PRAME与bcr/ab1基因表达 | 第53页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第53页 |
| ·重组载体的构建 | 第53页 |
| ·重组质拉的转化 | 第53页 |
| ·重组质拉的提取 | 第53页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第53页 |
| ·细胞遗传学检查 | 第53页 |
| ·统计 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-56页 |
| ·CML患者中PRAME与bcr/ab1基因的表达 | 第54-55页 |
| ·CML患者中PRAME基因低甲基化 | 第55-56页 |
| ·基因表达与PRAME低甲基化的关系 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第八章 结论及展望 | 第58-59页 |
| ·主要结论 | 第58页 |
| ·成功建立两种方法 | 第58页 |
| ·PRAME低甲基化与造血系统髓系肿瘤关系 | 第58页 |
| ·展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 发表的论文 | 第66页 |