| 中文摘要 | 第12-16页 |
| 英文摘要 | 第16-20页 |
| 符号说明 | 第22-23页 |
| 前言 | 第23-31页 |
| 1. microRNA在肿瘤发生、发展中的作用及机制 | 第23-26页 |
| 2. 不同的肿瘤miR-16表达不同,对肿瘤的作用机制不同 | 第26-27页 |
| 3. miR-16在胶质母细胞瘤中的表达及可能抑瘤机制 | 第27-29页 |
| 4. 胶质母细胞瘤中miR-16调控Wip1-ATM-p53信号通路可能的机制 | 第29-31页 |
| 材料与方法 | 第31-55页 |
| 1. 细胞功能实验 | 第31-36页 |
| 1.1 细胞系及实验分组 | 第31页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第31-33页 |
| 1.3 实验方法 | 第33-36页 |
| 1.3.1 SHG44、U87和U251细胞培养 | 第33页 |
| 1.3.2 SHG44、U87和U251细胞转染 | 第33-34页 |
| 1.3.3 SHG44、U87和U251细胞克隆形成实验 | 第34页 |
| 1.3.4 SHG44、U87和U251细胞EDU增殖实验 | 第34-35页 |
| 1.3.5 SHG44、U87和U251细胞侵袭实验 | 第35页 |
| 1.3.6 SHG44、U87和U251细胞凋亡实验 | 第35-36页 |
| 1.3.7 SHG44、U87和U251细胞周期实验 | 第36页 |
| 1.4 统计学分析 | 第36页 |
| 2. Wip1是miR-16靶基因的验证实验 | 第36-38页 |
| 2.1 利用TargetScan和miRanda数据库预测Wip1是miR-16靶基因 | 第36-37页 |
| 2.2 双荧光素酶报告基因实验检测miR-16的靶点Wip1 | 第37-38页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第37页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 2.2.3 统计学分析 | 第38页 |
| 3. miR-16调控Wip1-ATM-p53信号通路实验 | 第38-48页 |
| 3.1 qRT-PCR实验 | 第38-42页 |
| 3.1.1 标本 | 第38页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.1.4 统计学分析 | 第42页 |
| 3.2 Western blot实验 | 第42-48页 |
| 3.2.1 标本 | 第42页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第42-44页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第44-48页 |
| 3.2.4 统计学分析 | 第48页 |
| 4. 裸鼠颅内原位移植瘤实验 | 第48-55页 |
| 4.1 细胞培养材料和方法 | 第48-49页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第48页 |
| 4.1.2 实验分组 | 第48-49页 |
| 4.1.3 细胞转染方法 | 第49页 |
| 4.1.4 转染效率检测 | 第49页 |
| 4.2 裸鼠颅内原位移植瘤实验 | 第49-52页 |
| 4.2.1 裸鼠准备 | 第49-50页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第50-51页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第51-52页 |
| 4.3 qRT-PCR实验 | 第52-53页 |
| 4.4 Western blot实验 | 第53页 |
| 4.5 免疫组织化学实验 | 第53-55页 |
| 4.5.1 标本 | 第53页 |
| 4.5.2 试剂与仪器 | 第53-54页 |
| 4.5.3 实验方法 | 第54页 |
| 4.5.4 结果判断 | 第54-55页 |
| 4.5.5 统计学分析 | 第55页 |
| 结果 | 第55-60页 |
| 1. 过表达miR-16抑制SHG44、U87和U251细胞的增殖能力 | 第55页 |
| 2. 过表达miR-16抑制SHG44、U87和U251细胞的侵袭能力 | 第55-56页 |
| 3. 过表达miR-16促进SHG44、U87和U251肿瘤细胞凋亡、抑制细胞周期 | 第56页 |
| 4. miR-16靶向调控Wip1-ATM-p53信号通路,抑制胶质母细胞瘤生长 | 第56-57页 |
| 4.1 Wip1是miR-16的靶基因 | 第56页 |
| 4.2 过表达miR-16抑制Wip1 mRNA表达,促进ATM和p53 mRNA表达 | 第56-57页 |
| 4.3 过表达miR-16抑制Wip1蛋白表达,促进磷酸化ATM和P53蛋白表达 | 第57页 |
| 5. 过表达miR-16抑制裸鼠原位移植瘤生长 | 第57-60页 |
| 5.1 细胞转染效率结果: | 第57-58页 |
| 5.2 裸鼠原位移植瘤病理学观察结果 | 第58页 |
| 5.3 miR-16在胶质母细胞瘤中的表达低于正常脑组织 | 第58页 |
| 5.4 过表达miR-16抑制裸鼠原位移植瘤肿瘤生长 | 第58-59页 |
| 5.5 miR-16通过调控Wip1-ATM-p53信号通路抑制胶质母细胞瘤生长 | 第59-60页 |
| 5.5.1 裸鼠移植瘤中过表达miR-16抑制Wip1 mRNA表达,促进ATM和p53 mRNA表达 | 第59页 |
| 5.5.2 裸鼠移植瘤中过表达miR-16抑制Wip1蛋白表达,促进p-ATM蛋白和p-P53蛋白表达 | 第59-60页 |
| 讨论 | 第60-66页 |
| 1. miR16抑制胶质母细胞瘤生长 | 第61-62页 |
| 2. Wip1是miR-16的靶基因 | 第62-63页 |
| 3. miR-16通过调控Wip1-ATM-p53信号通路抑制胶质母细胞瘤生长 | 第63-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 附表 | 第67-77页 |
| 附图 | 第77-95页 |
| 参考文献 | 第95-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第105-106页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第106-109页 |
| 英文论文1 | 第109-132页 |
| 英文论文2 | 第132-143页 |
