| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 肝细胞的免疫学特点 | 第12-15页 |
| 1.1.1 肝脏是一个免疫耐受倾向的器官 | 第12-13页 |
| 1.1.2 CD4~+T与CD8~+T细胞是对抗肝脏感染的重要免疫细胞类型 | 第13-14页 |
| 1.1.3 肝细胞是抑制T细胞功能的重要肝内免疫调节细胞 | 第14-15页 |
| 1.2 固有免疫活化影响肝细胞的免疫学功能 | 第15-17页 |
| 1.2.1 危险相关分子模式与炎症小体 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Toll样受体 | 第16-17页 |
| 1.3 鞭毛素蛋白是肠道菌来源的免疫活性分子 | 第17-19页 |
| 1.4 鞭毛素蛋白调节肝内免疫应答及肝细胞免疫状态 | 第19-20页 |
| 1.4.1 促进肝内免疫细胞募集与活化 | 第19页 |
| 1.4.2 调节肝细胞的免疫抑制能力 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究要解决的科学问题 | 第20页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 1.7 研究方法与实验技术 | 第21-24页 |
| 1.7.1 研究方法 | 第21-22页 |
| 1.7.2 实验技术 | 第22-24页 |
| 1.7.2.1 高压水尾静脉注射鞭毛素蛋白 | 第22页 |
| 1.7.2.2 原位消化肝脏并分离肝细胞 | 第22页 |
| 1.7.2.3 肝细胞—脾细胞体外共培养 | 第22-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-46页 |
| 2.1 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验试剂 | 第25-28页 |
| 2.3 生物性材料 | 第28页 |
| 2.4 实验耗材 | 第28-29页 |
| 2.5 缓冲液及培养基配方 | 第29-31页 |
| 2.6 实验方法 | 第31-46页 |
| 2.6.1 重组蛋白SF及HV的表达与纯化 | 第31-32页 |
| 2.6.2 蛋白质内毒素去除(TritonX-114法) | 第32页 |
| 2.6.3 蛋白内毒素检测(鲎试剂凝胶法) | 第32-33页 |
| 2.6.4 蛋白质浓度测定(Bradford法) | 第33-34页 |
| 2.6.5 蛋白凝胶检测 | 第34-35页 |
| 2.6.6 检测SF及HV蛋白胞外TLR5信号通路活性实验 | 第35-37页 |
| 2.6.7 检测SF及HV蛋白胞内NLRC4信号通路活性实验 | 第37-38页 |
| 2.6.8 分离原代肝细胞 | 第38-40页 |
| 2.6.9 体外刺激原代肝细胞 | 第40页 |
| 2.6.10 RNA提取 | 第40-41页 |
| 2.6.11 逆转录 | 第41-42页 |
| 2.6.12 实时定量荧光PCR | 第42页 |
| 2.6.13 流式细胞术检测肝细胞待测免疫活性分子 | 第42-43页 |
| 2.6.14 脾细胞的制备 | 第43页 |
| 2.6.15 肝细胞—脾细胞的多种培养体系 | 第43-45页 |
| 2.6.16 肝细胞—脾细胞的培养体系中封闭免疫调节分子 | 第45-46页 |
| 第3章 实验结果 | 第46-68页 |
| 3.1 明确鞭毛素蛋白SF调节肝细胞免疫状态及调节过程依赖的通路 | 第46-50页 |
| 3.1.1 SF刺激肝细胞后,减弱肝细胞引起的T细胞功能抑制 | 第46-48页 |
| 3.1.2 SF活化肝细胞TLR5通路引起肝细胞免疫状态改变 | 第48-49页 |
| 3.1.3 SF刺激后的肝细胞调节CD8+T细胞转录与活化 | 第49-50页 |
| 3.2 筛选及检测鞭毛素蛋白刺激后肝细胞产生的免疫调节分子表达 | 第50-60页 |
| 3.2.1 筛选肝细胞可能表达的、并可作用于T细胞的免疫调节分子 | 第50-52页 |
| 3.2.2 体外刺激实验检测SF诱导肝细胞表达的免疫分子 | 第52-58页 |
| 3.2.2.1 mRNA表达水平 | 第52-53页 |
| 3.2.2.2 蛋白表达水平 | 第53-56页 |
| 3.2.2.3 检测ICAM-1、TNF-α、IL-6、GM-CSF分子表达变化依赖的通路 | 第56-58页 |
| 3.2.3 体内注射实验检测待测免疫调节分子mRNA表达及蛋白表达水平 | 第58-60页 |
| 3.2.3.1 mRNA表达水平 | 第58-59页 |
| 3.2.3.2 蛋白表达水平 | 第59-60页 |
| 3.3 探究SF刺激后,肝细胞对T细胞调节的分子机制 | 第60-68页 |
| 3.3.1 体外共培养实验检测肝细胞产生的关键调节分子存在形式 | 第60-63页 |
| 3.3.1.1 隔开培养 | 第61页 |
| 3.3.1.2 肝细胞上清转移 | 第61-63页 |
| 3.3.2 探究SF刺激后肝细胞对T细胞产生调节的关键效应分子 | 第63-68页 |
| 3.3.2.1 共培养实验阻断ICAM-1 | 第63-65页 |
| 3.3.2.2 上清转移封闭ICAM-1、IL-6、GM-CSF | 第65-68页 |
| 第4章 总结 | 第68-70页 |
| 第5章 讨论与展望 | 第70-76页 |
| 5.1 鞭毛素蛋白激活肝细胞TLR5通路,导致肝细胞免疫状态的改变 | 第70页 |
| 5.2 肝细胞TLR5通路经鞭毛素蛋白SF激活后产生免疫调节分子 | 第70-72页 |
| 5.2.1 ICAM-1对肝细胞及肝内微环境的免疫学意义 | 第70-71页 |
| 5.2.2 IL-6对肝细胞及肝内微环境的免疫学意义 | 第71页 |
| 5.2.3 GM-CSF对肝细胞及肝内微环境的免疫学意义 | 第71-72页 |
| 5.3 伤寒沙门氏菌鞭毛素蛋白SF调节肝细胞免疫状态的其他原因 | 第72-74页 |
| 5.3.1 蛋白质谱检测SF刺激后肝细胞蛋白变化 | 第72-74页 |
| 5.3.2 SF刺激下肝细胞产生的调节T细胞功能的可能关键效应分子 | 第74页 |
| 5.4 展望：SF—肝细胞—T细胞调节的应用前景 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 作者简历 | 第84-85页 |
