改良环介导等温扩增技术及其在肺炎支原体检测中的应用
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 核酸扩增技术发展历程 | 第12-13页 |
| 1.2 常见恒温扩增技术 | 第13-17页 |
| 1.2.1 链替代扩增 | 第13页 |
| 1.2.2 滚环核酸扩增 | 第13-14页 |
| 1.2.3 依赖核酸序列型扩增技术 | 第14页 |
| 1.2.4 依赖解旋酶的DNA扩增技术 | 第14页 |
| 1.2.5 环介导等温扩增技术 | 第14-17页 |
| 1.3 肺炎支原体研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 支原体概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 肺炎支原体感染发病机制 | 第18-19页 |
| 1.3.3 肺炎支原体常见的保守序列 | 第19-20页 |
| 1.4 肺炎支原体实验室诊断方法 | 第20-23页 |
| 1.4.1 分离培养 | 第20页 |
| 1.4.2 血清学检测 | 第20-22页 |
| 1.4.3 分子基因检测方法 | 第22-23页 |
| 1.5 本论文拟开展的工作 | 第23-25页 |
| 第2章 传统环介导等温扩增法检测肺炎支原体 | 第25-31页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.3 肺炎支原体基础培养基的配制及培养 | 第26页 |
| 2.4 LAMP引物设计 | 第26页 |
| 2.5 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.5.1 核酸提取 | 第26-28页 |
| 2.5.2 肺炎支原体传统LAMP法检测预实验 | 第28页 |
| 2.5.3 传统LAMP法可视化检测 | 第28页 |
| 2.6 实验结果和讨论 | 第28-30页 |
| 2.6.1 传统LAMP法电泳检测 | 第28-29页 |
| 2.6.2 传统LAMP法可视化检测分析 | 第29-30页 |
| 2.7 本章小结 | 第30-31页 |
| 第3章 发夹引物介导的恒温扩增体系的构建及应用 | 第31-42页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.3 引物设计 | 第32-33页 |
| 3.4 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.4.1 反应体系 | 第33页 |
| 3.4.2 反应条件优化 | 第33页 |
| 3.4.3 茎环引物优化 | 第33页 |
| 3.4.4 引物缺省实验 | 第33页 |
| 3.4.5 灵敏度实验 | 第33-34页 |
| 3.4.6 特异性检测 | 第34页 |
| 3.4.7 加速引物恒温扩增反应预实验 | 第34页 |
| 3.4.8 加速引物特异性试验 | 第34页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第34-40页 |
| 3.5.1 反应原理 | 第34-35页 |
| 3.5.2 反应条件的优化 | 第35-36页 |
| 3.5.3 茎环引物优化分析 | 第36-37页 |
| 3.5.4 引物缺省实验分析 | 第37-38页 |
| 3.5.5 灵敏度分析 | 第38页 |
| 3.5.6 特异性分析 | 第38-39页 |
| 3.5.7 加速引物预实验结果分析 | 第39-40页 |
| 3.5.8 加速引物特异性分析 | 第40页 |
| 3.6 本章小结 | 第40-42页 |
| 第4章 环介导等温扩增定量检测的初步研究 | 第42-46页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 实验材料 | 第42页 |
| 4.3 引物设计 | 第42-43页 |
| 4.4 实验方法 | 第43页 |
| 4.4.1 异引物对反应体系的影响 | 第43页 |
| 4.4.2 突引物对反应体的影响 | 第43页 |
| 4.4.3 温度对条带聚拢的影响 | 第43页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第43-45页 |
| 4.5.1 异引物对体系的影响 | 第43-44页 |
| 4.5.2 突变引物对体系的影响 | 第44-45页 |
| 4.5.3 提升反应温度对体系的影响 | 第45页 |
| 4.6 本章小结 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
