| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第6-7页 |
| 第一章 材料和方法 | 第7-19页 |
| 1.1 实验样本 | 第7页 |
| 1.1.1 样本来源 | 第7页 |
| 1.1.2 样本分组 | 第7页 |
| 1.2 主要仪器与耗材 | 第7-8页 |
| 1.2.1 实验仪器 | 第7-8页 |
| 1.2.2 实验耗材 | 第8页 |
| 1.3 实验试剂及主要溶液配制 | 第8-10页 |
| 1.3.1 主要实验试剂 | 第8-9页 |
| 1.3.2 待测基因的PCR引物序列 | 第9页 |
| 1.3.3 主要试剂配制 | 第9-10页 |
| 1.4 成人退变椎间盘髓核细胞（NP）原代、传代培养及处理 | 第10-12页 |
| 1.4.1 原代髓核细胞的培养步骤 | 第10-11页 |
| 1.4.2 髓核细胞的传代 | 第11页 |
| 1.4.3 髓核细胞的冻存 | 第11页 |
| 1.4.4 髓核细胞的复苏 | 第11-12页 |
| 1.5 TGFβ 3-P2A-TIMP1慢病毒载体感染人退变髓核细胞 | 第12-13页 |
| 1.5.1 慢病毒载体构建 | 第12页 |
| 1.5.2 慢病毒感染复数测定 | 第12页 |
| 1.5.3 慢病毒感染人退变髓核细胞 | 第12-13页 |
| 1.6 实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）检测法 | 第13-15页 |
| 1.6.1 样品制备 | 第13页 |
| 1.6.2 总RNA的提取 | 第13页 |
| 1.6.3 测定RNA浓度和纯度 | 第13页 |
| 1.6.4 反转录合成cDNA第一链 | 第13-14页 |
| 1.6.5 荧光实时定量PCR技术 | 第14-15页 |
| 1.7 Western blot检测法 | 第15-18页 |
| 1.7.1 细胞总蛋白的提取 | 第15页 |
| 1.7.2 配制SDS-PAGE凝胶 | 第15-16页 |
| 1.7.3 加样及电泳 | 第16-17页 |
| 1.7.4 湿法转膜 | 第17页 |
| 1.7.5 免疫反应（目的蛋白特异性结合抗体） | 第17-18页 |
| 1.8 统计学分析方法 | 第18-19页 |
| 第二章 实验结果 | 第19-26页 |
| 2.1 细胞培养 | 第19-21页 |
| 2.2 慢病毒感染及感染复数测定 | 第21-22页 |
| 2.2.1 感染复数测定（预实验） | 第21-22页 |
| 2.2.2 慢病毒感染 | 第22页 |
| 2.3 Real-time qPCR相关mRNA检测 | 第22-23页 |
| 2.4 Western blot相关蛋白检测 | 第23-26页 |
| 第三章 讨论 | 第26-28页 |
| 第四章 结论 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-32页 |
| 综述 | 第32-41页 |
| 综述参考文献 | 第37-41页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
