| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 主要英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 流感病毒综述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 流感病毒的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 流感病毒囊膜蛋白 | 第15页 |
| 1.1.3 流感病毒受体 | 第15-16页 |
| 1.1.4 禽流感病毒的流行现状 | 第16页 |
| 1.1.5 H9N2 AIV的流行现状 | 第16-17页 |
| 1.2 内皮细胞综述 | 第17-18页 |
| 2.1.1 内皮细胞简介 | 第17页 |
| 2.1.2 内皮细胞的免疫调节功能 | 第17-18页 |
| 2.1.3 内皮细胞对炎症反应的调节功能 | 第18页 |
| 2.1.4 流感病毒感染内皮细胞的研究现状 | 第18页 |
| 1.3 干扰素文献综述 | 第18-20页 |
| 1.3.1 干扰素简介 | 第18-19页 |
| 1.3.2 诱导干扰素产生的因素 | 第19页 |
| 1.3.3 干扰素诱导蛋白的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.4 IFITM1综述 | 第20-21页 |
| 1.4.1 IFITMs家族简介 | 第20-21页 |
| 1.4.2 IFITMs家族表达 | 第21页 |
| 1.4.3 IFITMs家族的生物学功能 | 第21页 |
| 1.5 IFIT1文献综述 | 第21-23页 |
| 1.5.1 IFITs家族简介 | 第21页 |
| 1.5.2 IFITs家族表达 | 第21-22页 |
| 1.5.3 IFITs家族的生物学功能 | 第22页 |
| 1.5.4 IFITs抗病毒机制 | 第22-23页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第23页 |
| 1.7 研究内容及技术路线 | 第23-25页 |
| 1.8 研究目标 | 第25-26页 |
| 第二章 H9N2 AIV感染人脐静脉内皮细胞及支气管上皮细胞的研究 | 第26-37页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 细胞和病毒 | 第26-27页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 主要仪器耗材 | 第27-28页 |
| 2.2.4 SPF鸡胚 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.3.1 主要试剂的配制 | 第28-30页 |
| 2.3.2 细胞的复苏、培养、冻存 | 第30页 |
| 2.3.3 病毒培养及滴度的测定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 HUVECs及BEAS-2Bs细胞膜表面SA2-3Gal的检测 | 第31页 |
| 2.3.5 H9N2 AIV在HUVECs及BEAS-2Bs上复制情况的检测 | 第31页 |
| 2.3.6 数据分析 | 第31页 |
| 2.4 实验结果 | 第31-35页 |
| 2.4.1 培养的HUVECs和BEAS-2Bs细胞状态 | 第31-32页 |
| 2.4.2 HUVECs和BEAS-2Bs细胞膜表面SA2-3Gal表达情况 | 第32-33页 |
| 2.4.3 H9N2 AIV在HUVECs和BEAS-2Bs上的复制 | 第33-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 2.6 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 H9N2 AIV和灭活病毒颗粒对IFITM1和IFIT1表达的影响 | 第37-50页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第38页 |
| 3.2.3 细胞和病毒 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-45页 |
| 3.3.1 主要溶液的配制 | 第39-40页 |
| 3.3.2 细胞样品总RNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.3.3 组织样品cDNA的合成 | 第41页 |
| 3.3.4 PCR及荧光定量Real Time PCR(RT-PCR)检测步骤 | 第41-42页 |
| 3.3.5 膜蛋白抽提步骤 | 第42-43页 |
| 3.3.6 Western blot步骤 | 第43-44页 |
| 3.3.7 灭活病毒颗粒的制备 | 第44页 |
| 3.3.8 H9N2 AIV和灭活病毒颗粒对IFITM1和IFIT1表达的影响 | 第44页 |
| 3.3.9 数据分析 | 第44-45页 |
| 3.4 试验结果 | 第45-47页 |
| 3.4.1 病毒颗粒接种诱导HUVECs高表达IFIT1 | 第45-46页 |
| 3.4.2 病毒颗粒接种诱导HUVECs高表达IFITM1 | 第46-47页 |
| 3.5 讨论 | 第47-49页 |
| 3.6 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 H9N2 AIV诱导IFITM1和IFIT1表达机制的初步研究 | 第50-60页 |
| 4.1 前言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第50-51页 |
| 4.2.2 主要仪器耗材 | 第51页 |
| 4.2.3 细胞和病毒 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 4.3.1 主要试剂的配置 | 第51页 |
| 4.3.2 ELISA试剂盒操作步骤 | 第51-52页 |
| 4.3.3 免疫荧光操作步骤 | 第52页 |
| 4.3.4 RT-PCR及Western blot操作方法 | 第52页 |
| 4.3.5 H9N2 AIV和灭活病毒颗粒对IFN-α/β的影响 | 第52页 |
| 4.3.7 HA和NA对IFN-α/β的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.8 HA和NA蛋白对IFITM1和IFIT1表达的影响 | 第53页 |
| 4.3.9 灭活病毒粒子在细胞内的定位 | 第53页 |
| 4.4 试验结果 | 第53-58页 |
| 4.4.1 病毒和病毒颗粒诱导IFN-α/β表达的水平 | 第53-54页 |
| 4.4.2 HA和NA诱导的IFN-α/β的水平 | 第54-55页 |
| 4.4.3 HA和NA蛋白处理不能升高IFITM1和IFIT1的表达 | 第55-57页 |
| 4.4.4 灭活病毒颗粒在细胞内的定位 | 第57-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58-59页 |
| 4.6 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 诱导的IFITM1和IFIT1对细胞抗病毒反应的影响 | 第60-71页 |
| 5.1 前言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第60-61页 |
| 5.2.2 主要仪器设备 | 第61页 |
| 5.2.3 细胞和病毒 | 第61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 5.3.1 主要溶液的配制 | 第61页 |
| 5.3.2 siRNA转染步骤 | 第61-62页 |
| 5.3.3 CRISPR激活质粒的合成步骤 | 第62-63页 |
| 5.3.4 CRISP/CAS9过表达质粒转染步骤 | 第63页 |
| 5.3.5 病毒颗粒刺激的抗病毒反应 | 第63页 |
| 5.3.6 Western blot步骤 | 第63页 |
| 5.3.7 通过siRNA敲减来验证IFITM1/IFIT1对细胞抗病毒能力的影响 | 第63页 |
| 5.3.8 过表达IFITM1/IFIT1对细胞抗病毒能力的影响 | 第63-64页 |
| 5.4 试验结果 | 第64-69页 |
| 5.4.1 病毒颗粒接种诱导了HUVECs和BEAS-2Bs的抗病毒状态 | 第64页 |
| 5.4.2 病毒颗粒诱导的IFITM1显著增强了细胞的抗病毒状态 | 第64-67页 |
| 5.4.3 病毒颗粒诱导的IFIT1不能显著增强细胞的抗病毒状态 | 第67-69页 |
| 5.5 讨论 | 第69-70页 |
| 5.6 小结 | 第70-71页 |
| 第六章 接种病毒颗粒对IFITM1体内表达及攻毒小鼠肺损伤的影响 | 第71-81页 |
| 6.1 前言 | 第71页 |
| 6.2 试验材料 | 第71-72页 |
| 6.2.1 主要试剂 | 第71页 |
| 6.2.2 主要仪器耗材 | 第71-72页 |
| 6.2.3 实验动物 | 第72页 |
| 6.3 实验方法 | 第72-75页 |
| 6.3.1 主要溶液的配制 | 第72页 |
| 6.3.2 病毒颗粒的制备 | 第72页 |
| 6.3.3 病毒颗粒的接种方法 | 第72-73页 |
| 6.3.4 肺组织总RNA提取 | 第73页 |
| 6.3.5 RT-PCR用引物 | 第73页 |
| 6.3.6 肺组织蛋白的提取 | 第73-74页 |
| 6.3.7 病理切片操作流程 | 第74页 |
| 6.3.8 肺组织石蜡切片HE染色步骤 | 第74页 |
| 6.3.9 病毒颗粒接种对肺组织中IFITM1表达的影响 | 第74页 |
| 6.3.10 病毒颗粒接种对攻毒小鼠肺组织病变的影响 | 第74-75页 |
| 6.3.11 病毒颗粒接种对攻毒小鼠肺组织中IL-6和TNF-α的影响 | 第75页 |
| 6.4 试验结果 | 第75-78页 |
| 6.4.1 病毒颗粒接种升高了肺组织中IFITM1的表达 | 第75-76页 |
| 6.4.2 病毒颗粒接种减轻了攻毒肺组织的损伤 | 第76-77页 |
| 6.4.3 病毒颗粒接种降低了攻毒小鼠肺组织中IL-6和TNF-α的水平 | 第77-78页 |
| 6.5 讨论 | 第78-80页 |
| 6.6 小结 | 第80-81页 |
| 第七章 结论与创新点 | 第81-82页 |
| 7.1 结论 | 第81页 |
| 7.2 创新点 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-94页 |
| 附录 | 第94-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 作者简历 | 第102页 |
