| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-14页 |
| 1.1 无乳链球菌 | 第10-11页 |
| 1.1.1 无乳链球菌简介 | 第10页 |
| 1.1.2 人纤溶酶原结构及功能 | 第10-11页 |
| 1.1.3 病原菌利用宿主Plg的致病机制 | 第11页 |
| 1.1.4 无乳链球菌GapC蛋白 | 第11页 |
| 1.2 脂蛋白(a)结构及功能 | 第11-12页 |
| 1.3 立题依据 | 第12-13页 |
| 1.4 研究内容 | 第13-14页 |
| 2 实验材料 | 第14-19页 |
| 2.1 仪器设备 | 第14页 |
| 2.2 主要试剂 | 第14-19页 |
| 2.2.1 化学试剂 | 第14-15页 |
| 2.2.2 试剂盒和标准品 | 第15页 |
| 2.2.3 填料及纯化缓冲液 | 第15-16页 |
| 2.2.4 电泳及转膜缓冲液 | 第16-17页 |
| 2.2.5 常用缓冲液 | 第17页 |
| 2.2.6 引物 | 第17页 |
| 2.2.7 菌株与载体 | 第17-18页 |
| 2.2.8 培养基 | 第18-19页 |
| 3 实验方法 | 第19-28页 |
| 3.1 rGapC和rGapC△K重组蛋白的表达纯化 | 第19-25页 |
| 3.1.1 无乳链球菌基因组提取 | 第19-20页 |
| 3.1.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第20页 |
| 3.1.3 gapC、gapC△K目的片段的扩增 | 第20-21页 |
| 3.1.4 PCR产物的纯化 | 第21页 |
| 3.1.5 pASK-IBA37Plus质粒的提取 | 第21-22页 |
| 3.1.6 pASK-IBA-37Plus质粒的酶切 | 第22页 |
| 3.1.7 pASK-IBA-37Plus质粒的回收纯化 | 第22页 |
| 3.1.8 gapC、gapC△K目的片段与pASK-IBA-37Plus质粒的连接 | 第22-23页 |
| 3.1.9 制备E.coliBL21及JM109感受态 | 第23页 |
| 3.1.10 连接产物的转化至E.coliJM109和抗性筛选 | 第23页 |
| 3.1.11 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第23-24页 |
| 3.1.12 基因测序 | 第24页 |
| 3.1.13 重组质粒转化至E.coliBL | 第24页 |
| 3.1.14 rGapC和rGapC△K蛋白的诱导表达 | 第24-25页 |
| 3.1.15 rGapC和rGapC△K蛋白的纯化 | 第25页 |
| 3.2 BCA法测定蛋白含量 | 第25-26页 |
| 3.3 rGapC与Lp(a)的相互作用 | 第26-27页 |
| 3.3.1 ELISA检测rGapC与Lp(a)的相互作用 | 第26页 |
| 3.3.2 Pulldown检测rGapC与Lp(a)的相互作用 | 第26-27页 |
| 3.4 rGapC与Lp(a)的作用机制的研究 | 第27-28页 |
| 3.4.1 ELISA检测rGapC与LDL的结合情况 | 第27页 |
| 3.4.2 ELISA检测EACA对rGapC与Lp(a)结合的抑制 | 第27页 |
| 3.4.3 ELISA检测rGapC和rGapC△K与Plg的结合情况 | 第27页 |
| 3.4.4 ELISA检测Lp(a)对rGapC与Plg结合的抑制 | 第27-28页 |
| 4 实验结果与分析 | 第28-36页 |
| 4.1 rGapC和rGapC△K两种重组蛋白的表达纯化 | 第28-32页 |
| 4.1.1 无乳链球菌基因组的提取结果 | 第28页 |
| 4.1.2 gapC和gapC△K目的片段的扩增结果 | 第28-29页 |
| 4.1.3 菌落PCR鉴定阳性克隆结果 | 第29页 |
| 4.1.4 基因测序结果 | 第29页 |
| 4.1.5 rGapC和rGapC△K蛋白诱导表达结果 | 第29-30页 |
| 4.1.6 rGapC和rGapC△K蛋白的纯化结果 | 第30-31页 |
| 4.1.7 BCA法测定蛋白含量 | 第31-32页 |
| 4.2 rGapC和rGapC△K与Lp(a)的结合 | 第32-33页 |
| 4.2.1 ELISA检测rGapC和rGapC△K与Lp(a)的结合 | 第32页 |
| 4.2.2 Pulldown结合Westernblot检测rGapC和rGapC△K与Lp(a)的结合 | 第32-33页 |
| 4.3 rGapC与Lp(a)的结合机制 | 第33-36页 |
| 4.3.1 ELISA检测rGapC与LDL的结合情况 | 第33页 |
| 4.3.2 ELISA检测EACA对rGapC与Lp(a)结合的抑制 | 第33-34页 |
| 4.3.3 ELISA检测rGapC和rGapC△K与Plg的结合情况 | 第34-35页 |
| 4.3.4 ELISA检测Lp(a)对rGapC与Plg结合的抑制 | 第35-36页 |
| 5 讨论 | 第36-37页 |
| 6 结论 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 作者简介 | 第42页 |
