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平菇NADPH氢化酶基因NOXA的特性及功能研究

致谢第4-9页
摘要第9-10页
第一章 文献综述第10-20页
    1.1 概述第10-12页
        1.1.1 活性氧第10页
        1.1.2 NADPH氧化酶第10-12页
        1.1.3 乙醇脱氢酶启动子第12页
    1.2 基因功能的研究方法第12-17页
        1.2.1 基因敲除第12-13页
        1.2.2 基因敲入第13页
        1.2.3 超表达第13页
        1.2.4 反义RNA技术第13页
        1.2.5 RNA干扰第13-16页
        1.2.6 其他方法第16-17页
    1.3 真菌遗传转化研究进展第17-20页
        1.3.1 PEG介导的原生质体转化第17页
        1.3.2 基因枪法第17-18页
        1.3.3 电激转化法第18页
        1.3.4 限制性内切酶介导的DNA整合法第18-19页
        1.3.5 农杆菌介导转化法第19-20页
第二章 发夹质粒遗传转化平菇第20-44页
    2.1 实验材料第20-21页
        2.1.1 菌种和质粒第20页
        2.1.2 培养基配方第20页
        2.1.3 主要试剂第20-21页
        2.1.4 主要溶液配制第21页
    2.2 实验方法第21-27页
        2.2.1 质粒PAN7-1 和NOXA-P8的提取与纯化第21-22页
        2.2.2 原生质体的制备与再生第22页
        2.2.3 PEG-Cacl2介导质粒PAN7-1 和NOXA-P8共转化原生质体第22-23页
        2.2.4 转化子的筛选和鉴定第23-24页
        2.2.5 RT-PCR检测基因NOXA表达第24-26页
        2.2.6 抗性转化子的遗传稳定性分析第26-27页
        2.2.7 氮蓝四唑NBT染色菌丝第27页
        2.2.8 平板出菇第27页
        2.2.9 基因NOXA进化树构建第27页
        2.2.10 基因NOXA的氨基酸结果和高级结构的分析第27页
    2.3 结果与分析第27-43页
        2.3.1 质粒PAN7-1 和NOXA-P8的提取与纯化第27-28页
        2.3.2 原生质体的制备第28页
        2.3.3 原生质体的再生第28页
        2.3.4 平菇原生质体转化第28-29页
        2.3.5 含潮霉素抗性转化子的复筛与生长特性第29页
        2.3.6 PCR鉴定阳性转化子第29-36页
        2.3.7 半定量PCR第36-38页
        2.3.8 生长速度测定结果第38页
        2.3.9 活性氧含量测定结果第38-40页
        2.3.10 氮蓝四唑NBT染色结果第40页
        2.3.11 平板出菇结果第40-41页
        2.3.12 进化树构建结果第41-42页
        2.3.13 基因NOXA蛋白结构分析结果第42-43页
    2.4 本章小结第43-44页
第三章 基因alcA启动子启动的表达质粒pEGFP-C1-alcA的构建第44-53页
    3.1 材料与方法第44页
        3.1.1 菌种和质粒第44页
        3.1.2 培养基的配制第44页
        3.1.3 主要试剂第44页
        3.1.4 仪器第44页
    3.2 实验方法第44-49页
        3.2.1 引物设计第44-45页
        3.2.2 目的基因的PCR扩增第45页
        3.2.3 PCR产物回收纯化第45-46页
        3.2.4 酶切PCR回收产物第46-47页
        3.2.5 连接产物转化感受态细胞第47页
        3.2.6 DNA序列测定及分析第47-48页
        3.2.7 重组表达载体pEGFP-C1-alcA的获得及验证第48-49页
    3.3 结果分析第49-52页
        3.3.1 片段PCR扩增检测结果第49页
        3.3.2 重组质粒PCR及酶切验证第49-51页
        3.3.3 重组表达载体pEGFP-C1-alcA酶切验证第51-52页
    3.4 本章小结第52-53页
第四章 重组表达载体脂质体转化黑根霉第53-60页
    4.1 实验材料第53-54页
        4.1.1 菌种和质粒第53页
        4.1.2 培养基配方第53页
        4.1.3 主要试剂第53页
        4.1.4 仪器第53-54页
    4.2 实验方法第54-55页
        4.2.1 脂质体转化方法第54页
        4.2.2 PCR鉴定转化子第54-55页
        4.2.3 PCR产物回收纯化第55页
    4.3 结果分析第55-58页
        4.3.1 荧光检测结果第55页
        4.3.2 PCR鉴定转化子第55-58页
    4.4 本章小结第58-60页
第五章 重组表达载体原生质体转化平菇第60-70页
    5.1 实验材料第60-61页
        5.1.1 菌种和质粒第60页
        5.1.2 培养基配方第60页
        5.1.3 主要试剂第60-61页
        5.1.4 主要溶液配制第61页
        5.1.5 仪器第61页
    5.2 实验方法第61-62页
        5.2.1 原生质体的制备与再生第61页
        5.2.2 PEG-Cacl2介导质粒PAN7-1 和重组表达载体pEGFP-C1-alcA共转化原生质体第61页
        5.2.3 转化子的筛选和鉴定第61-62页
        5.2.4 转化子荧光检测第62页
    5.3 结果与分析第62-69页
        5.3.1 原生质体的制备第62-63页
        5.3.2 原生质体的再生第63页
        5.3.3 平菇原生质体转化第63-64页
        5.3.4 拟转化子PCR验证结果第64-69页
    5.4 本章小结第69-70页
第六章 讨论第70-71页
    6.1 RNAi在平菇基因功能研究中的应用第70页
    6.2 诱导型启动子驱动外源表达基因表达的问题第70-71页
参考文献第71-75页
ABSTRACT第75-76页

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