| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 活性氧 | 第10页 |
| 1.1.2 NADPH氧化酶 | 第10-12页 |
| 1.1.3 乙醇脱氢酶启动子 | 第12页 |
| 1.2 基因功能的研究方法 | 第12-17页 |
| 1.2.1 基因敲除 | 第12-13页 |
| 1.2.2 基因敲入 | 第13页 |
| 1.2.3 超表达 | 第13页 |
| 1.2.4 反义RNA技术 | 第13页 |
| 1.2.5 RNA干扰 | 第13-16页 |
| 1.2.6 其他方法 | 第16-17页 |
| 1.3 真菌遗传转化研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 PEG介导的原生质体转化 | 第17页 |
| 1.3.2 基因枪法 | 第17-18页 |
| 1.3.3 电激转化法 | 第18页 |
| 1.3.4 限制性内切酶介导的DNA整合法 | 第18-19页 |
| 1.3.5 农杆菌介导转化法 | 第19-20页 |
| 第二章 发夹质粒遗传转化平菇 | 第20-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基配方 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 质粒PAN7-1 和NOXA-P8的提取与纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.2 原生质体的制备与再生 | 第22页 |
| 2.2.3 PEG-Cacl2介导质粒PAN7-1 和NOXA-P8共转化原生质体 | 第22-23页 |
| 2.2.4 转化子的筛选和鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 RT-PCR检测基因NOXA表达 | 第24-26页 |
| 2.2.6 抗性转化子的遗传稳定性分析 | 第26-27页 |
| 2.2.7 氮蓝四唑NBT染色菌丝 | 第27页 |
| 2.2.8 平板出菇 | 第27页 |
| 2.2.9 基因NOXA进化树构建 | 第27页 |
| 2.2.10 基因NOXA的氨基酸结果和高级结构的分析 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-43页 |
| 2.3.1 质粒PAN7-1 和NOXA-P8的提取与纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.2 原生质体的制备 | 第28页 |
| 2.3.3 原生质体的再生 | 第28页 |
| 2.3.4 平菇原生质体转化 | 第28-29页 |
| 2.3.5 含潮霉素抗性转化子的复筛与生长特性 | 第29页 |
| 2.3.6 PCR鉴定阳性转化子 | 第29-36页 |
| 2.3.7 半定量PCR | 第36-38页 |
| 2.3.8 生长速度测定结果 | 第38页 |
| 2.3.9 活性氧含量测定结果 | 第38-40页 |
| 2.3.10 氮蓝四唑NBT染色结果 | 第40页 |
| 2.3.11 平板出菇结果 | 第40-41页 |
| 2.3.12 进化树构建结果 | 第41-42页 |
| 2.3.13 基因NOXA蛋白结构分析结果 | 第42-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 基因alcA启动子启动的表达质粒pEGFP-C1-alcA的构建 | 第44-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 培养基的配制 | 第44页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第44页 |
| 3.1.4 仪器 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第44-45页 |
| 3.2.2 目的基因的PCR扩增 | 第45页 |
| 3.2.3 PCR产物回收纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.4 酶切PCR回收产物 | 第46-47页 |
| 3.2.5 连接产物转化感受态细胞 | 第47页 |
| 3.2.6 DNA序列测定及分析 | 第47-48页 |
| 3.2.7 重组表达载体pEGFP-C1-alcA的获得及验证 | 第48-49页 |
| 3.3 结果分析 | 第49-52页 |
| 3.3.1 片段PCR扩增检测结果 | 第49页 |
| 3.3.2 重组质粒PCR及酶切验证 | 第49-51页 |
| 3.3.3 重组表达载体pEGFP-C1-alcA酶切验证 | 第51-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 重组表达载体脂质体转化黑根霉 | 第53-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第53页 |
| 4.1.2 培养基配方 | 第53页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.4 仪器 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 脂质体转化方法 | 第54页 |
| 4.2.2 PCR鉴定转化子 | 第54-55页 |
| 4.2.3 PCR产物回收纯化 | 第55页 |
| 4.3 结果分析 | 第55-58页 |
| 4.3.1 荧光检测结果 | 第55页 |
| 4.3.2 PCR鉴定转化子 | 第55-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第五章 重组表达载体原生质体转化平菇 | 第60-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.1.1 菌种和质粒 | 第60页 |
| 5.1.2 培养基配方 | 第60页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第60-61页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第61页 |
| 5.1.5 仪器 | 第61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-62页 |
| 5.2.1 原生质体的制备与再生 | 第61页 |
| 5.2.2 PEG-Cacl2介导质粒PAN7-1 和重组表达载体pEGFP-C1-alcA共转化原生质体 | 第61页 |
| 5.2.3 转化子的筛选和鉴定 | 第61-62页 |
| 5.2.4 转化子荧光检测 | 第62页 |
| 5.3 结果与分析 | 第62-69页 |
| 5.3.1 原生质体的制备 | 第62-63页 |
| 5.3.2 原生质体的再生 | 第63页 |
| 5.3.3 平菇原生质体转化 | 第63-64页 |
| 5.3.4 拟转化子PCR验证结果 | 第64-69页 |
| 5.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第六章 讨论 | 第70-71页 |
| 6.1 RNAi在平菇基因功能研究中的应用 | 第70页 |
| 6.2 诱导型启动子驱动外源表达基因表达的问题 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| ABSTRACT | 第75-76页 |
