中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-8页 |
第一部分 研究背景 | 第8-19页 |
一、组蛋白乙酰转移酶 p300/CBP 复合物的研究进展 | 第8-14页 |
(一) 组蛋白乙酰转移酶的研究进展 | 第8-10页 |
(二) p300/CBP 的结构和功能 | 第10-12页 |
(三) p300/CBP 的作用机制 | 第12-14页 |
(四) p300/CBP 与Ras 信号通路的关系 | 第14页 |
二、RASSF2 基因的研究进展 | 第14-17页 |
(一) RASSF 基因家族 | 第14-15页 |
(二) RASSF2 基因的结构 | 第15-16页 |
(三) RASSF2 基因的生物学功能 | 第16页 |
(四) RASSF2 启动子甲基化与基因沉默 | 第16-17页 |
三、本论文的研究内容和意义 | 第17-19页 |
(一) 立题依据 | 第17页 |
(二) 本文的研究内容和意义 | 第17-19页 |
第二部分 实验材料与方法 | 第19-32页 |
一、实验材料 | 第19页 |
(一) 质粒 | 第19页 |
(二) 报告基因质粒的构建 | 第19页 |
(三) 蛋白质和抗体 | 第19页 |
(四) 哺乳动物细胞系 | 第19页 |
(五) 试剂 | 第19页 |
二、实验方法 | 第19-32页 |
Ⅰ、分子生物学试验方法 | 第19-27页 |
(一) 分子克隆 | 第19页 |
(二) DNA 的琼脂糖电泳 | 第19-20页 |
(三) 质粒大量制备的方法 | 第20-21页 |
(四) 哺乳动物细胞总 RNA 的提取和反转录 | 第21-22页 |
(五) 逆转录 | 第22-23页 |
(六)PCR 和荧光实时定量 realtime PCR | 第23-24页 |
(七) 染色质免疫沉淀实验 | 第24-26页 |
(八) RNA 干涉(RNA siRNA) | 第26-27页 |
Ⅱ、细胞生物学实验方法 | 第27-31页 |
(一) 哺乳动物细胞系的培养 | 第27页 |
(二) 真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测 | 第27-28页 |
(三) 脂质体转染 | 第28-29页 |
(四) 蛋白质的Western Blotting 分析 | 第29-31页 |
(五) 集落形成实验 | 第31页 |
Ⅲ、统计分析 | 第31-32页 |
第三部分 实验结果与分析 | 第32-39页 |
一 p300 通过上调 RASSF2 表达诱导细胞晚期凋亡 | 第32-34页 |
二 p300 对 RASSF2 基因转录的激活作用 | 第34页 |
三 p300 提高 RASSF2 启动子处组蛋白 H3 和 H4 的乙酰化水平 | 第34-36页 |
四 p300 与 Sp1 协同激活 RASSF2 基因表达 | 第36-37页 |
五 p300 与 Sp1 在 RASSF2 基因表达调控过程中的相互作用关系 | 第37-39页 |
第四部分 讨论 | 第39-42页 |
主要结论和创新点 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-49页 |
致谢 | 第49-50页 |
在学期间公开发表论文及著作情况 | 第50页 |