| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-37页 |
| 1.1 黑粉菌研究 | 第11-20页 |
| 1.1.1 玉米黑粉菌 | 第13-15页 |
| 1.1.2 大麦坚黑粉菌 | 第15页 |
| 1.1.3 格氏梅拉菌 | 第15-16页 |
| 1.1.4 茭白黑粉菌 | 第16-19页 |
| 1.1.5 黑粉菌研究展望 | 第19-20页 |
| 1.2 差异表达基因克隆技术的研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.1 差异表达基因克隆技术概况 | 第20-21页 |
| 1.2.2 抑制性消减杂交技术的原理 | 第21-23页 |
| 1.2.3 抑制性消减杂交技术的应用 | 第23-24页 |
| 1.3 真菌转基因技术研究进展 | 第24-31页 |
| 1.3.1 真菌遗传转化方法研究 | 第25-27页 |
| 1.3.1.1 PEG-CaCl_2介导的遗传转化 | 第26页 |
| 1.3.1.2 限制性内切酶介导的遗传转化 | 第26-27页 |
| 1.3.1.3 农杆菌介导的遗传转化 | 第27页 |
| 1.3.2 农杆菌介导真菌遗传转化研究 | 第27-31页 |
| 1.3.2.1 农杆菌介导真菌转化的原理 | 第27-29页 |
| 1.3.2.2 农杆菌转化真菌思路 | 第29-30页 |
| 1.3.2.3 农杆菌介导转化在真菌中的应用 | 第30-31页 |
| 1.4 植物真菌与宿主之间的相互作用 | 第31-34页 |
| 1.4.1 真菌对于植物宿主的影响 | 第32页 |
| 1.4.2 宿主对于植物真菌的影响 | 第32-33页 |
| 1.4.3 一种新的调控思路 | 第33-34页 |
| 1.5 真菌RNAi研究 | 第34-37页 |
| 1.5.1 RNAi的原理及特点 | 第34-35页 |
| 1.5.2 真菌中RNAi途径 | 第35-37页 |
| 第二章 引言 | 第37-42页 |
| 2.1 研究的背景和意义 | 第37-39页 |
| 2.2 研究的技术路线 | 第39-42页 |
| 第三章 格氏梅拉菌菌丝形成有关基因的分离 | 第42-60页 |
| 3.1 材料 | 第42页 |
| 3.1.1 菌种 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂盒 | 第42页 |
| 3.2 方法 | 第42-52页 |
| 3.2.1 格氏梅拉菌mRNA的提取 | 第42-45页 |
| 3.2.1.1 格氏梅拉菌总RNA的大量提取 | 第42-44页 |
| 3.2.1.2 格氏梅拉菌总RNA鉴定 | 第44页 |
| 3.2.1.3 mRNA分离(Oligotex mRNA Kit) | 第44-45页 |
| 3.2.1.4 mRNA鉴定 | 第45页 |
| 3.2.2 cDNA消减 | 第45-49页 |
| 3.2.2.1 cDNA合成 | 第45-47页 |
| 3.2.2.2 Rasl酶切 | 第47页 |
| 3.2.2.3 接头连接 | 第47-48页 |
| 3.2.2.4 抑制消减第一轮杂交 | 第48-49页 |
| 3.2.2.5 抑制消减第二轮杂交 | 第49页 |
| 3.2.3 差减文库的构建 | 第49-52页 |
| 3.2.3.1 PCR扩增 | 第49-51页 |
| 3.2.3.2 大肠杆菌电转化感受态细胞制备 | 第51页 |
| 3.2.3.3 文库转化 | 第51-52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-56页 |
| 3.3.1 格氏梅拉菌PM1和PM2的菌落形态 | 第52-53页 |
| 3.3.2 PM1和PM2的mRNA鉴定 | 第53页 |
| 3.3.3 PM1和PM2的mRNA鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.4 PM1和PM2的cDNA的Rasl酶切鉴定 | 第54页 |
| 3.3.5 PCR鉴定消减文库的克隆片段 | 第54-55页 |
| 3.3.6 消减文库构建 | 第55页 |
| 3.3.7 消减文库构建 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-60页 |
| 3.4.1 消减文库序列与菌丝形成相关性分析 | 第56-58页 |
| 3.4.1.1 超氧化物岐化酶 | 第56-57页 |
| 3.4.1.2 热休克蛋白 | 第57页 |
| 3.4.1.3 泛素-核糖体蛋白 | 第57页 |
| 3.4.1.4 核糖体蛋白 | 第57-58页 |
| 3.4.2 抑制消减杂交 | 第58-60页 |
| 第四章 格氏梅拉真菌和黑粉菌转基因体系建立 | 第60-74页 |
| 4.1 材料 | 第60-62页 |
| 4.1.1 菌种 | 第60页 |
| 4.1.2 载体 | 第60-62页 |
| 4.1.3 试剂、酶与试剂盒 | 第62页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第62页 |
| 4.1.5 其它试剂、培养基见附录1 | 第62页 |
| 4.2 方法 | 第62-69页 |
| 4.2.1 载体的构建 | 第63-66页 |
| 4.2.2 农杆菌介导黑粉菌的转化 | 第66-67页 |
| 4.2.3 黑粉菌转化子验证 | 第67-69页 |
| 4.3 实验结果 | 第69-73页 |
| 4.3.1 黑粉菌抗生素耐受性 | 第69-70页 |
| 4.3.2 乙酰丁香酮对转化的影响 | 第70页 |
| 4.3.3 用于转化的培养基PH值的筛选 | 第70-71页 |
| 4.3.4 用于转化的共培养温度的筛选 | 第71-72页 |
| 4.3.5 用于转化的农杆菌浓度的筛选 | 第72页 |
| 4.3.6 转sgfp玉米黑粉菌的荧光显微观察 | 第72-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73-74页 |
| 缩略词—中英文对照 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| References | 第78-83页 |
| 附录1 常用试剂配制 | 第83-88页 |
| 附录2 差减文库测序结果和序列比对 | 第88-94页 |
