| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 转录因子 | 第13页 |
| 1.2 WRKY转录因子的发现 | 第13-14页 |
| 1.3 WRKY转录因子结构与分类 | 第14-16页 |
| 1.4 WRKY转录因子起源与分子进化 | 第16-17页 |
| 1.5 WRKY转录因子生物学功能 | 第17-20页 |
| 1.5.1 WRKY转录因子调控植物生物胁迫应答反应 | 第17-19页 |
| 1.5.2 WRKY转录因子调控植物非生物胁迫应答反应 | 第19页 |
| 1.5.3 WRKY转录因子在植物生长发育和物质代谢过程中的作用 | 第19-20页 |
| 1.6 WRKY转录因子调控植物逆境反应的机理 | 第20-22页 |
| 1.7 本实验的目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 引物 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-46页 |
| 2.2.1 植物材料的培养与处理 | 第24-25页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 利用Trizol Kit提取总RNA | 第25页 |
| 2.2.2.2 利用CTAB法提取总RNA | 第25-26页 |
| 2.2.3 植物基因组的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3.1 CTAB法提取基因组DNA | 第26-27页 |
| 2.2.3.2 小量法提取基因组DNA | 第27页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第27页 |
| 2.2.5 cDNA的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.6 cDNA的5'末端加尾 | 第28页 |
| 2.2.7 PCR扩增目的片段的回收 | 第28-29页 |
| 2.2.8 目的片段与克隆载体的连接 | 第29页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29-30页 |
| 2.2.9.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.9.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.10 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.10.1 微量法提取质粒DNA | 第30页 |
| 2.2.10.2 大量法提取质粒DNA | 第30-31页 |
| 2.2.11 重组质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.2.12 DNA序列测序 | 第31-32页 |
| 2.2.13 cDNA全长序列的测定 | 第32-35页 |
| 2.2.13.1 中间片段的获得 | 第32页 |
| 2.2.13.2 5'端序列的获得 | 第32-33页 |
| 2.2.13.3 3'端序列的获得 | 第33-34页 |
| 2.2.13.4 cDNA全长的获得 | 第34-35页 |
| 2.2.14 基因组序列的获得 | 第35-36页 |
| 2.2.15 启动子序列克隆 | 第36-37页 |
| 2.2.16 半定量PCR检测目的基因表达 | 第37-38页 |
| 2.2.17 实时定量PCR | 第38页 |
| 2.2.18 基因枪法瞬时表达 | 第38-40页 |
| 2.2.18.1 洋葱表皮瞬时表达载体的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.18.2 微弹制备 | 第39页 |
| 2.2.18.3 基因枪转化 | 第39-40页 |
| 2.2.19 植物真核表达载体的构建及转化 | 第40-43页 |
| 2.2.19.1 真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.19.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 2.2.19.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第41页 |
| 2.2.19.4 农杆菌介导转化烟草 | 第41-42页 |
| 2.2.19.5 超表达转基因植株的鉴定 | 第42-43页 |
| 2.2.20 转基因植株的抗病性分析 | 第43-45页 |
| 2.2.20.1 病原菌培养基的配制 | 第43页 |
| 2.2.20.2 病原菌的培养 | 第43页 |
| 2.2.20.3 接种真菌 | 第43-44页 |
| 2.2.20.4 接种细菌 | 第44页 |
| 2.2.20.5 转基因植株抗病性数据统计 | 第44页 |
| 2.2.20.6 植物叶片台盼蓝染色方法 | 第44页 |
| 2.2.20.7 植物叶片DAB染色方法 | 第44页 |
| 2.2.20.8 植物叶片NBT染色方法 | 第44-45页 |
| 2.2.21 网络资源及数据库 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-64页 |
| 3.1 棉花GhWRKY44基因的克隆及序列分析 | 第46-48页 |
| 3.1.1 GhWRKY44中间片段的分离 | 第46页 |
| 3.1.2 GhWRKY44 5'端片段的分离 | 第46页 |
| 3.1.3 GhWRKY44 3'端片段的分离 | 第46-47页 |
| 3.1.4 GhWRKY44全长cDNA序列的分离 | 第47页 |
| 3.1.5 GhWRKY44启动子序列的分离 | 第47-48页 |
| 3.2 GhWRKY44的序列分析 | 第48-52页 |
| 3.2.1 GhWRKY44的全长cDNA序列分析 | 第48页 |
| 3.2.2 GhWRKY44编码的蛋白序列分析 | 第48-51页 |
| 3.2.3 GhWRKY44启动子序列分析 | 第51-52页 |
| 3.3 GhWRKY44亚细胞定位分析 | 第52-53页 |
| 3.4 GhWRKY44的表达特性分析 | 第53-56页 |
| 3.4.1 不同组织部位中GhWRKY44的表达特性分析 | 第53-54页 |
| 3.4.2 非生物胁迫下GhWRKY44的表达特性分析 | 第54-55页 |
| 3.4.3 生物胁迫下GhWRKY44的表达特性分析 | 第55页 |
| 3.4.4 信号分子对GhWRKY44 mRNA水平变化的影响 | 第55-56页 |
| 3.5 GhWRKY44超表达本生烟植株的获得和鉴定 | 第56-58页 |
| 3.5.1 GhWRKY44超表达植株的获得 | 第56-57页 |
| 3.5.2 GhWRKY44超表达植株的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.6 超表达GhWRKY44转基因本生烟的功能分析 | 第58-64页 |
| 3.6.1 细菌抗性分析 | 第58-59页 |
| 3.6.2 真菌抗性分析 | 第59-61页 |
| 3.6.3 病原菌侵染叶片后台盼蓝染色死细胞观察 | 第61-62页 |
| 3.6.4 病原菌侵染叶片后ROS的检测 | 第62页 |
| 3.6.5 超表达GhWRKY44对转基因植株中抗性相关基因的影响 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| 4.1 GhWRKY44转录因子结构特性 | 第64-65页 |
| 4.2 GhWRKY44受多种环境胁迫及信号分子的诱导 | 第65-66页 |
| 4.3 超表达GhWRKY44提高了转基因植株对病原菌的抗性 | 第66-67页 |
| 4.4 GhWRKY44参与调节体内的ROS水平 | 第67-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第78页 |
