| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-32页 |
| 1.1 前言 | 第11-12页 |
| 1.2 抗水稻纹枯病遗传育种研究进展 | 第12-20页 |
| 1.2.1 纹枯病发生的概况 | 第12-16页 |
| 1.2.1.1 纹枯病发病症状 | 第13页 |
| 1.2.1.2 立枯丝核菌及其侵染循环 | 第13-15页 |
| 1.2.1.3 水稻纹枯病菌的致病机理 | 第15-16页 |
| 1.2.2 水稻抗纹枯病遗传研究现状 | 第16-19页 |
| 1.2.2.1 水稻纹枯病抗性遗传方式 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2 水稻纹枯病抗性遗传机理及其研究方法 | 第18-19页 |
| 1.2.3 水稻抗纹枯病育种研究现状 | 第19-20页 |
| 1.3 转基因水稻的研究 | 第20-27页 |
| 1.3.1 转基因植株的研究现状及前景 | 第20-21页 |
| 1.3.2 转基因水稻的研究现状及前景 | 第21-24页 |
| 1.3.3 转基因水稻的研究方法及其安全性评价 | 第24-27页 |
| 1.3.3.1 转基因水稻的研究方法 | 第24-26页 |
| 1.3.3.2 转基因水稻的安全性评价 | 第26-27页 |
| 1.4 转基因水稻对纹枯病抗性的研究 | 第27-30页 |
| 1.4.1 转植物防卫反应基因对纹枯病抗性的研究 | 第27-29页 |
| 1.4.2 转化天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因 | 第29-30页 |
| 1.5 本课题的研究目的与意义以及主要技术路线 | 第30-32页 |
| 1.5.1 本课题的研究目的及意义 | 第30-31页 |
| 1.5.2 主要技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 水稻GAFP基因遗传转化体系的建立 | 第32-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.1.1 供试水稻材料 | 第32页 |
| 2.1.2 质粒及菌株 | 第32页 |
| 2.1.3 培养基 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法及步骤 | 第34-36页 |
| 2.2.1 植物转化载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.2 愈伤组织的培养及转基因水稻的获得 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第36-39页 |
| 2.3.1 GAFP基因产物的效果检测 | 第36页 |
| 2.3.2 根癌农杆菌中植物表达载体的验证 | 第36-38页 |
| 2.3.2.1 PCR及酶切消化验证 | 第36-37页 |
| 2.3.2.2 测序验证 | 第37-38页 |
| 2.3.3 转GAFP基因水稻植株的获得 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 2.4.1 LMNT双感组培特性的摸索 | 第39-40页 |
| 2.4.1.1 外植体的选择 | 第39-40页 |
| 2.4.1.2 分化得苗率低的原因 | 第40页 |
| 2.4.2 转化LMNT双感的原因 | 第40-41页 |
| 第三章 转基因水稻植株的分子检测 | 第41-54页 |
| 3.1 材料与方法 | 第41-46页 |
| 3.1.1 转基因水稻植株的PCR检测 | 第41-42页 |
| 3.1.2 转基因水稻植株的Southern Blot检测 | 第42-44页 |
| 3.1.2.1 探针的标记 | 第42页 |
| 3.1.2.2 DNA酶切、电泳及凝胶处理 | 第42-43页 |
| 3.1.2.3 DNA印迹 | 第43页 |
| 3.1.2.4 杂交 | 第43页 |
| 3.1.2.5 免疫检测 | 第43-44页 |
| 3.1.3 转基因水稻植株的qRT-PCR检测 | 第44-45页 |
| 3.1.4 转基因水稻植株的Western Blot检测 | 第45-46页 |
| 3.1.4.1 水稻总蛋白的提取 | 第45页 |
| 3.1.4.2 蛋白电泳 | 第45-46页 |
| 3.1.4.3 Western杂交 | 第46页 |
| 3.2 转基因后代分子检测结果 | 第46-50页 |
| 3.2.1 转基因水稻植株的PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.2.2 转基因水稻植株的Southern Blot检测 | 第47-48页 |
| 3.2.3 转基因水稻植株的qRT-PCR检测 | 第48-50页 |
| 3.2.3.1 RNA的提取与检测 | 第48页 |
| 3.2.3.2 qRT-PCR检测结果 | 第48-50页 |
| 3.2.4 转基因水稻植株的Western Blot检测 | 第50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-54页 |
| 3.3.1 转基因水稻的分子检测 | 第50-52页 |
| 3.3.2 RT-PCR和qRT-PCR的比较 | 第52-54页 |
| 第四章 转GAFP基因植株田间纹枯病抗性鉴定及主要农艺性状的考察 | 第54-64页 |
| 4.1 材料与方法 | 第54-56页 |
| 4.1.1 供试水稻材料及田间试验设计 | 第54页 |
| 4.1.2 立枯丝核菌菌株的培养及其接种方法 | 第54-55页 |
| 4.1.3 纹枯病病级病指的调查方法 | 第55-56页 |
| 4.1.3.1 病级调查 | 第55页 |
| 4.1.3.2 病指调查 | 第55-56页 |
| 4.1.4 试验统计及数据分析方法 | 第56页 |
| 4.2 转基因水稻植株农艺性状的考察 | 第56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-61页 |
| 4.3.1 R6547(籼稻)转GAFP基因植株对纹枯病抗性鉴定 | 第56页 |
| 4.3.2 徐稻3号(粳稻)转GAFP基因植株对纹枯病抗性鉴定 | 第56-60页 |
| 4.3.2.1 最高病级分析结果 | 第57-58页 |
| 4.3.2.2 平均病级分析结果 | 第58页 |
| 4.3.2.3 最高病级与病情指数联合分析结果 | 第58-60页 |
| 4.3.4 徐稻3号转GAFP基因植株的农艺性状的分析结果 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-64页 |
| 4.4.1 年际间纹枯病发病轻重差异的原因 | 第61-62页 |
| 4.4.2 水稻纹枯病的调查 | 第62-63页 |
| 4.4.3 转基因后代纹枯病抗性鉴定的评价 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-71页 |
| 附件1 质粒DNA的提取验证及转化农杆菌 | 第64-65页 |
| 附件2 农杆菌介导法转化流程 | 第65-66页 |
| 附件3 CTAB小样快速抽提水稻基因组DNA | 第66-67页 |
| 附件4 Southern Blot相关试剂的配制及DNA的提取 | 第67-69页 |
| 附件5 Trizol法提取总RNA | 第69-70页 |
| 附件6 纹枯病菌的培养与保存 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
