| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第14-24页 |
| 第一章 多能性干细胞及 PRMT5 研究进展 | 第14-24页 |
| 1.1 多能性干细胞研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞 | 第14页 |
| 1.1.2 诱导性多能干细胞研究现状 | 第14-15页 |
| 1.1.3 奶山羊干细胞相关研究 | 第15-16页 |
| 1.2 PRMT5 的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.2.1 精氨酸甲基转移酶 | 第16-18页 |
| 1.2.2 PRMT5 的功能及作用机理 | 第18-22页 |
| 1.2.3 PRMT5 影响多能性的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3 小结与展望 | 第23-24页 |
| 试验研究 | 第24-53页 |
| 第二章 奶山羊 PRMT5 慢病毒载体构建及基因分析 | 第24-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第24-28页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5 PRMT5 在奶山羊不同组织的表达及定位检测 | 第26-27页 |
| 2.1.6 pCDH-CMV-PRMT5-EF1-GreenPuro 载体构建 | 第27页 |
| 2.1.7 病毒包装及病毒感染后检测 | 第27-28页 |
| 2.2 结果 | 第28-33页 |
| 2.2.1 QRT-PCR 检测 PRMT5 在奶山羊不同组织的表达 | 第28-29页 |
| 2.2.2 PRMT5 在奶山羊睾丸和卵巢组织的表达定位 | 第29-30页 |
| 2.2.3 载体构建及生物信息学分析 | 第30-32页 |
| 2.2.4 GEF 细胞超表达 PRMT5 后免疫荧光及半定量检测 PRMT5 表达情况 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 奶山羊胚胎成纤维细胞重编程 | 第35-45页 |
| 3.1 材料和方法 | 第35-37页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第35-36页 |
| 3.1.4 GEF 的分离及慢病毒包装 | 第36页 |
| 3.1.5 不同转染试剂及方法对奶山羊胚胎成纤维细胞转染效果比较 | 第36页 |
| 3.1.6 奶山羊胚胎成纤维细胞重编程 | 第36页 |
| 3.1.7 多能性细胞鉴定 | 第36页 |
| 3.1.8 类胚体生成及向三胚层分化检测 | 第36-37页 |
| 3.2 结果 | 第37-43页 |
| 3.2.1 GEF 细胞形态学观察 | 第37页 |
| 3.2.2 不同转染试剂转染奶山羊胚胎成纤维细胞效果比较 | 第37-39页 |
| 3.2.3 重编程过程不同阶段细胞形态结果 | 第39-40页 |
| 3.2.4 重编程细胞多能性检测结果 | 第40-41页 |
| 3.2.5 重编程细胞向三胚层分化的免疫荧光检测结果 | 第41-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43页 |
| 3.4 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 PRMT5 通过影响 P53 信号通路影响重编程 | 第45-53页 |
| 4.1 材料和方法 | 第45-47页 |
| 4.1.1 GEF 细胞超表达 PRMT5 | 第45页 |
| 4.1.2 RT-PCR 检测 | 第45-46页 |
| 4.1.3 细胞周期检测 | 第46页 |
| 4.1.4 Western Blot 检测 | 第46页 |
| 4.1.5 超表达 PRMT5 对 GEF 重编程时细胞 AP 阳性率的检测 | 第46页 |
| 4.1.6 超表达 PRMT5 细胞对克隆形成的影响 | 第46页 |
| 4.1.7 P53 抑制剂对细胞增殖和 PRMT5 表达量的影响 | 第46-47页 |
| 4.2 结果 | 第47-50页 |
| 4.2.1 细胞形态观察 | 第47页 |
| 4.2.2 细胞周期结果 | 第47页 |
| 4.2.3 PCR 和 QRT-PCR 结果 | 第47页 |
| 4.2.4 Western Blot 结果 | 第47-48页 |
| 4.2.5 超表达 PRMT5 对诱导山羊胚胎成纤维细胞的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.6 P53 抑制剂能够促进细胞增殖，并且能够降低 PRMT5 的表达 | 第49-50页 |
| 4.3 讨论 | 第50-52页 |
| 4.4 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53页 |
| 本文研究的创新点及进一步研究的课题 | 第53-54页 |
| 创新点 | 第53页 |
| 进一步研究课题 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介及研究生期间工作进展 | 第63页 |
