| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-40页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 1.1 内毒素脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS） | 第14-26页 |
| 1.1.1 脂多糖（LPS）的基本概述 | 第14-15页 |
| 1.1.2 脂多糖的合成途径 | 第15-20页 |
| 1.1.3 脂多糖的转运过程 | 第20-22页 |
| 1.1.4 LPS 的结构修饰 | 第22-25页 |
| 1.1.5 类脂 A 的结构与细菌的毒性 | 第25-26页 |
| 1.2 内毒素脂多糖与肥胖等代谢性疾病之间关系的研究 | 第26-32页 |
| 1.2.1 肥胖等代谢性疾病的概述 | 第26-27页 |
| 1.2.2 肠道菌群的结构功能和对人体健康的影响 | 第27-30页 |
| 1.2.3 内毒素产生菌与肥胖等代谢性疾病关系的研究进展 | 第30-32页 |
| 1.3 利用同源重组技术进行缺失突变的研究方法 | 第32-38页 |
| 1.3.1 引物设计应遵循的基本原则 | 第32-33页 |
| 1.3.2 基于自杀性载体的同源重组方法 | 第33-36页 |
| 1.3.2.1 pKNG101 载体 | 第33-34页 |
| 1.3.2.2 基因缺失突变的方法和步骤 | 第34-36页 |
| 1.3.3 克隆文库技术 | 第36-37页 |
| 1.3.4 ERIC-PCR 指纹图谱 | 第37-38页 |
| 1.3.5 变性梯度凝胶电泳（DGGE）指纹图谱 | 第38页 |
| 1.4 细胞实验中所用的技术 | 第38-40页 |
| 1.4.1 细胞培养的基本技术 | 第38-39页 |
| 1.4.2 用于细胞毒性检测的 MTT 检测技术 | 第39-40页 |
| 第二章 对阴沟肠杆菌 B29 的 LPS 生物合成基因 waaL 和 waaG 的敲除实验 | 第40-74页 |
| 引言 | 第40-41页 |
| 2.1 材料与方法 | 第41-48页 |
| 2.1.1 确定要敲除的基因并设计引物 | 第41-43页 |
| 2.1.1.1 确定 B29 中合适的可以突变的目的基因 | 第41页 |
| 2.1.1.2 针对 waaL 基因的引物设计 | 第41-42页 |
| 2.1.1.3 针对 waaG 基因的引物设计 | 第42-43页 |
| 2.1.2 获得缺失了部分目的基因的重组片段 | 第43-46页 |
| 2.1.2.1 纯菌 DNA 的提取 | 第43-44页 |
| 2.1.2.2 摸索不同引物对的退火温度并扩增目的基因两侧片段 | 第44页 |
| 2.1.2.3 PCR 产物的纯化方法 | 第44-45页 |
| 2.1.2.4 获得缺失部分序列的重组片段 | 第45页 |
| 2.1.2.5 PCR 产物的割胶回收纯化 | 第45-46页 |
| 2.1.3 构建重组质粒 | 第46-47页 |
| 2.1.3.1 从 E.coli CC118 菌株中抽提 pKNG101 质粒 | 第46页 |
| 2.1.3.2 重组片段与 pKNG101 载体的连接 | 第46-47页 |
| 2.1.4 用重组质粒转化中介菌株 | 第47页 |
| 2.1.5 单交换 B29 菌株的筛选 | 第47-48页 |
| 2.1.6 双交换菌株的筛选 | 第48页 |
| 2.2 实验结果 | 第48-72页 |
| 2.2.1 获取缺失部分目的基因的连接片段 | 第48-52页 |
| 2.2.1.1 确定合适的退火温度并扩增目的基因两翼片段 | 第49-50页 |
| 2.2.1.2 通过 SOE-PCR 获得缺失部分序列的连接片段 | 第50-52页 |
| 2.2.2 用连接片段和自杀性载体构建重组质粒 | 第52-54页 |
| 2.2.3 重组质粒转化中介菌株 E.coli SM10 | 第54-56页 |
| 2.2.4 中介菌株与目的菌株 B29 的双亲结合转移及单交换筛选 | 第56-59页 |
| 2.2.4.1 获得 waaL 基因发生单交换的 B29 菌株 | 第57-58页 |
| 2.2.4.2 获得 waaG 基因发生单交换的 B29 菌株 | 第58-59页 |
| 2.2.5 双交换筛选突变菌株 | 第59-68页 |
| 2.2.5.1 筛选发生双交换的 B29 waaL 基因的缺失突变株 | 第59-64页 |
| 2.2.5.2 筛选发生双交换的 B29 waaG 基因的缺失突变株 | 第64-68页 |
| 2.2.6 ERIC-PCR 验证突变菌株 | 第68-69页 |
| 2.2.6.1 B29△waaL 突变株与 B29 野生型菌株的 ERIC-PCR 图谱 | 第68页 |
| 2.2.6.2 B29△waaG 突变株与 B29 野生型菌株的 ERIC-PCR 图谱 | 第68-69页 |
| 2.2.7 对原菌株及突变株的 16S rRNA 基因的 V3 区片段进行 PCR-DGGE 验证 | 第69-70页 |
| 2.2.8 对原菌株及突变株的目的基因片段及 16S rRNA 基因进行 Sanger 测序 | 第70-72页 |
| 2.2.8.1 对目的基因片段的测序结果 | 第70-71页 |
| 2.2.8.2 对 16S rRNA 基因的测序结果 | 第71-72页 |
| 2.3 讨论 | 第72-73页 |
| 2.4 本章小结 | 第73-74页 |
| 第三章 比较野生型 B29 菌株与两株突变株之间的差异变化 | 第74-82页 |
| 3.1 材料与方法 | 第74-75页 |
| 3.1.1 B29 野生型和突变型菌株的 LPS 银染图谱 | 第74-75页 |
| 3.1.2 LPS 的提取及内毒素活性检测 | 第75页 |
| 3.1.3 生长曲线测定 | 第75页 |
| 3.2 实验结果 | 第75-80页 |
| 3.2.1 B29 野生型及突变型菌株的 LPS 电泳图 | 第75-76页 |
| 3.2.2 LAL 法对突变型菌株的内毒素活性测定 | 第76-77页 |
| 3.2.3 B29 野生型与突变型菌株的生长曲线测定 | 第77-78页 |
| 3.2.4 B29 野生型与突变型菌株的 LPS 对 HT-29 细胞的细胞毒性实验 | 第78-80页 |
| 3.3 讨论 | 第80-81页 |
| 3.4 本章小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-102页 |
| 附录 1 溶液试剂和培养基配方 | 第102-105页 |
| 附录 2 仪器设备 | 第105-106页 |
| 附录 3 缩写和全称 | 第106-107页 |
| 研究生阶段已发表的论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
