| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 载脂蛋白 E（ApoE）基因简介 | 第13-16页 |
| 1.1.1 载脂蛋白家族概述 | 第13-14页 |
| 1.1.2 ApoE 基因结构 | 第14页 |
| 1.1.3 ApoE 蛋白结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.1.4 ApoE 与疾病 | 第15-16页 |
| 1.2 ZFN 与 TALEN 技术简介 | 第16-23页 |
| 1.2.1 ZFN 技术简介 | 第18-21页 |
| 1.2.1.1 ZFN 结构及作用原理 | 第18-19页 |
| 1.2.1.2 ZFN 应用及优缺点 | 第19-21页 |
| 1.2.2 TALEN 技术简介 | 第21-23页 |
| 1.2.2.1 TALEN 结构及作用原理 | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 TALEN 应用及优缺点 | 第22-23页 |
| 第二章 靶向敲除 ApoE 基因的 ZFN 的构建及活性检测 | 第23-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-25页 |
| 2.1.1 材料 | 第23页 |
| 2.1.1.1 载体骨架与菌种 | 第23页 |
| 2.1.1.2 主要试剂仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 方法 | 第23-25页 |
| 2.1.2.1 目标基因靶位点的选择 | 第23页 |
| 2.1.2.2 锌指蛋白 ZFP 的合成 | 第23-24页 |
| 2.1.2.3 ZFNs 酵母表达载体及对应报告载体的构建 | 第24页 |
| 2.1.2.4 利用酵母双杂交原理筛选特异锌指 | 第24页 |
| 2.1.2.5 ZFNs 真核表达载体及报告载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.1.2.6 在 HEK293 细胞中 ZFNs 活性的检测 | 第25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.2.1 猪 ApoE 基因靶位点的选择 | 第25页 |
| 2.2.2 锌指核酸酶的组装 | 第25-27页 |
| 2.2.2.1 特异 3 锌指蛋白序列获得和引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 重叠 PCR 合成 3 锌指蛋白 DNA 序列及 ZFP 与 FokI 的组装 | 第26-27页 |
| 2.2.3 ZFNs 在酵母细胞中的活性检测 | 第27-28页 |
| 2.2.3.1 酵母验证系统报告载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.3.2 报告载体和 ZFNs 表达载体共转化酵母细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.4 ZFNs 在哺乳细胞中的活性检测 | 第28-29页 |
| 2.2.4.1 ZFNs 真核表达载体及报告载体构建结果 | 第28页 |
| 2.2.4.2 ZFNs 在 HEK293 细胞中活性验证结果 | 第28-29页 |
| 2.3 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 靶向敲除 ApoE 基因的 TALEN 的构建及活性检测 | 第32-38页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-34页 |
| 3.1.1 载体骨架与菌种 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第32页 |
| 3.1.3 方法 | 第32-34页 |
| 3.1.3.1 靶点选择及模块组装 | 第32-33页 |
| 3.1.3.2 报告载体构建 | 第33页 |
| 3.1.3.3 转染 HEK293 细胞进行活性检测 | 第33-34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.2.1 TALEN 结合位点四联模块选择（表 3-2） | 第34页 |
| 3.2.2 TALE 四联模块扩增 | 第34页 |
| 3.2.3 报告载体及 TALEN 表达载体测序结果与模拟克隆结果一致 | 第34-35页 |
| 3.2.4 在 HEK293 细胞中检测 TALEN 活性 | 第35-36页 |
| 3.3 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 结论与展望 | 第38-39页 |
| 4.1 主要结论 | 第38页 |
| 4.2 主要创新点 | 第38页 |
| 4.3 需要进一步解决的问题 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-47页 |
| 附录 | 第47-53页 |
| 附录 1 试验中所用主要仪器和设备 | 第47-48页 |
| 附录 2 DNA 纯化过程（Takara 凝胶回收试剂盒） | 第48-49页 |
| 附录 3 质粒小提方法（Omega Bio-Tek Plasmid Mini Kit I） | 第49-50页 |
| 附录 4 贴壁细胞的转染操作规程（梭华-Sofast ） | 第50-51页 |
| 附录 5 简单快捷酵母转化步骤 | 第51-52页 |
| 附录 6 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介及发表论文情况 | 第54页 |
