| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第1章 引言 | 第9-12页 |
| 第2章 材料 | 第12-17页 |
| 2.1 细胞株 | 第12页 |
| 2.2 裸鼠 | 第12页 |
| 2.3 主要实验设备 | 第12-13页 |
| 2.4 主要试剂及耗材 | 第13-14页 |
| 2.5 自配试剂 | 第14-17页 |
| 第3章 方法 | 第17-28页 |
| 3.1 Hep3B 细胞培养 | 第17-19页 |
| 3.1.1 细胞复苏 | 第17页 |
| 3.1.2 细胞传代 | 第17-18页 |
| 3.1.3 细胞冻存 | 第18页 |
| 3.1.4 细胞计数 | 第18-19页 |
| 3.2 细胞转染 | 第19-22页 |
| 3.2.1 质粒提取 | 第19-21页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第21-22页 |
| 3.3 Western blot 方法检测转染不同质粒后细胞 TLR4 蛋白表达情况 | 第22-24页 |
| 3.3.1 细胞总蛋白的提取 | 第22页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE 电泳 | 第22-23页 |
| 3.3.3 转膜 | 第23页 |
| 3.3.4 封闭 | 第23页 |
| 3.3.5 免疫反应 | 第23-24页 |
| 3.3.6 化学发光、显影、定影 | 第24页 |
| 3.3.7 凝胶图像分析 | 第24页 |
| 3.4 裸鼠移植瘤实验 | 第24-25页 |
| 3.4.1 建立肝癌裸鼠移植瘤模型 | 第24-25页 |
| 3.4.2 移植瘤内注射重组慢病毒载体 | 第25页 |
| 3.4.3 绘制移植瘤生长曲线及计算瘤重抑瘤率 | 第25页 |
| 3.5 半定量 RT-PCR 检测裸鼠移植瘤中 TLR4 mRNA 的表达情况 | 第25-27页 |
| 3.5.1 总 RNA 提取 | 第25-26页 |
| 3.5.2 RNA 完整性鉴定 | 第26页 |
| 3.5.3 RNA 逆转录成 cDNA | 第26页 |
| 3.5.4 PCR 扩增 | 第26-27页 |
| 3.5.5 琼脂糖凝胶电泳及分析 | 第27页 |
| 3.6 Western bolt 检测裸鼠移植瘤中 TLR4 蛋白的表达情况 | 第27页 |
| 3.7 统计学分析 | 第27-28页 |
| 第4章 结果 | 第28-35页 |
| 4.1 Lipofectamin 2000 转染效率检测 | 第28页 |
| 4.2 Western bolt 检测干扰效率 | 第28-29页 |
| 4.3 人肝细胞癌裸鼠移植瘤生长情况及瘤重比较 | 第29-32页 |
| 4.4 裸鼠移植瘤 TLR4 基因 mRNA 的表达情况 | 第32-33页 |
| 4.5 裸鼠移植瘤 TLR4 基因蛋白的表达情况 | 第33-35页 |
| 第5章 讨论 | 第35-39页 |
| 第6章 结论与展望 | 第39-40页 |
| 6.1 结论 | 第39页 |
| 6.2 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第43-44页 |
| 综述 | 第44-51页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
