| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第12-17页 |
| 1.1 前言 | 第12页 |
| 1.2 Timeless基因的结构 | 第12-13页 |
| 1.3 Timeless在生物节律中的功能 | 第13页 |
| 1.4 Timeless在细胞周期中的功能 | 第13-14页 |
| 1.5 Timeless在小鼠组织胚胎的发育中的作用 | 第14页 |
| 1.6 Timeless在肿瘤的发生、发展和诊疗中作用的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.6.1 肿瘤的发生和发展 | 第14-16页 |
| 1.6.2 肿瘤的诊疗 | 第16页 |
| 1.7 本研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1 细胞株 | 第17页 |
| 2.2 试剂盒 | 第17页 |
| 2.3 试剂 | 第17-18页 |
| 2.4 试剂配制 | 第18-20页 |
| 2.5 耗材 | 第20页 |
| 2.6 仪器设备 | 第20-21页 |
| 3 实验方法 | 第21-27页 |
| 3.1 肝癌细胞中内源性TIMELESS表达水平的检测 | 第21-23页 |
| 3.1.1 细胞培养 | 第21页 |
| 3.1.2 制备细胞裂解液 | 第21-22页 |
| 3.1.3 蛋白质浓度测定(BCA法) | 第22页 |
| 3.1.4 Western-blot | 第22-23页 |
| 3.2 筛选干涉内源性TIMELESS表达水平的siRNA片段 | 第23-24页 |
| 3.2.1 siRNA的制备 | 第23页 |
| 3.2.2 转染siRNA片段 | 第23-24页 |
| 3.2.3 siRNA干涉效果的检测 | 第24页 |
| 3.3 重组表达载体pcDNA_4-Flag-Timeless在肝癌细胞中的过表达 | 第24-26页 |
| 3.3.1 重组载体pcDNA4-Flag-Timeless的制备 | 第24-25页 |
| 3.3.2 转染 | 第25-26页 |
| 3.3.3 质粒过表达效果检测 | 第26页 |
| 3.4 TIMELESS表达水平变化对肝癌细胞增殖的影响：MTT方法 | 第26页 |
| 3.5 TIMELESS表达水平变化对肝癌细胞克隆形成能力的影响 | 第26-27页 |
| 3.6 TIMELESS表达水平变化对细胞凋亡的影响 | 第27页 |
| 3.7 数据分析 | 第27页 |
| 4 实验结果 | 第27-40页 |
| 4.1 TIMELESS在不同肝癌细胞中表达水平检测 | 第27-29页 |
| 4.1.1 Western-blot上样量的确定 | 第27-28页 |
| 4.1.2 检测不同肝癌细胞中TIMELESS的表达水平 | 第28-29页 |
| 4.2 筛选干涉HepG_2细胞中TIMELESS表达水平的siRNA片段 | 第29-32页 |
| 4.2.1 实验siRNA的选用 | 第29页 |
| 4.2.2 siRNA片段能够有效干涉HepG_2细胞内源性TIMELESS表达水平 | 第29-30页 |
| 4.2.3 干涉效果的时间点检测 | 第30-32页 |
| 4.3 Flag-TIMELESS重组蛋白在肝癌细胞HepG_2中过表达 | 第32-34页 |
| 4.4 TIMELESS表达水平降低促进肝癌细胞HepG_2的体外增殖 | 第34-36页 |
| 4.5 TIMELESS表达水平降低增强肝癌细胞HepG_2的克隆形成能力 | 第36-38页 |
| 4.6 TIMELESS表达水平降低抑制肝癌细胞HepG_2的凋亡 | 第38-40页 |
| 5 讨论 | 第40-43页 |
| 5.1 改变细胞内源性TIMELESS表达水平的方法 | 第40-41页 |
| 5.2 TIMELESS表达水平改变对其在肿瘤细胞中生物学功能的影响 | 第41-42页 |
| 5.3 Timeless可能作为肿瘤诊断和治疗的靶分子 | 第42-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 附录A | 第47-48页 |
| 作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第48-50页 |
| 学位论文数据集 | 第50页 |
