| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 深海微生物的研究概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 海洋微生物资源 | 第12-13页 |
| 1.1.2 深海微生物的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 几种常见功能酶的介绍 | 第15-22页 |
| 1.2.1 淀粉酶 | 第15-17页 |
| 1.2.2 纤维素酶 | 第17-18页 |
| 1.2.3 蛋白酶 | 第18-19页 |
| 1.2.4 脂肪酶 | 第19-20页 |
| 1.2.5 壳聚糖酶 | 第20-21页 |
| 1.2.6 褐藻胶裂解酶 | 第21页 |
| 1.2.7 卡拉胶酶 | 第21-22页 |
| 1.3 普鲁兰酶的研究概况 | 第22-26页 |
| 1.3.1 普鲁兰酶的分类 | 第22-23页 |
| 1.3.2 普鲁兰酶的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3.3 普鲁兰酶的基因工程研究 | 第24-25页 |
| 1.3.4 普鲁兰酶的应用 | 第25-26页 |
| 1.4 本文研究的主要内容 | 第26-27页 |
| 2 微生物资源的获取及多样性分析 | 第27-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-28页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 培养基配制 | 第28页 |
| 2.2 菌株的获取 | 第28-30页 |
| 2.2.1 样品的来源 | 第28-30页 |
| 2.2.2 样品的处理 | 第30页 |
| 2.2.3 菌株的分离 | 第30页 |
| 2.2.4 菌种的保藏 | 第30页 |
| 2.3 菌株的鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.2 PCR扩增16SrDNA | 第31-32页 |
| 2.3.3 序列比对、分析与统计 | 第32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-39页 |
| 2.4.1 可培养细菌的获取 | 第32-33页 |
| 2.4.2 菌株16SrDNA基因片段的扩增 | 第33-34页 |
| 2.4.3 鉴定结果统计与多样性分析 | 第34-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 3 多种功能酶生产菌株的筛选与产普鲁兰酶菌株的特性研究 | 第40-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-42页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 培养基与贮液 | 第41-42页 |
| 3.1.4 供试菌株 | 第42页 |
| 3.2 多种功能酶生产菌株的筛选 | 第42-44页 |
| 3.2.1 菌株的活化 | 第42-43页 |
| 3.2.2 产淀粉酶菌株的初筛 | 第43页 |
| 3.2.3 产纤维素酶菌株的初筛 | 第43页 |
| 3.2.4 产蛋白酶菌株的初筛 | 第43页 |
| 3.2.5 产脂肪酶菌株的初筛 | 第43页 |
| 3.2.6 产壳聚酶菌株的初筛 | 第43页 |
| 3.2.7 产褐藻胶裂解酶菌株的初筛 | 第43页 |
| 3.2.8 产卡拉胶酶菌株的初筛 | 第43-44页 |
| 3.3 产普鲁兰酶菌株的特性研究 | 第44-48页 |
| 3.3.1 产普鲁兰酶菌株的初筛与复筛 | 第44-46页 |
| 3.3.2 菌株生产普鲁兰酶能力的探索 | 第46-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-57页 |
| 3.4.1 7 种功能酶生产菌株的筛选结果统计 | 第48-49页 |
| 3.4.2 产普鲁兰酶菌株的筛选结果 | 第49-51页 |
| 3.4.3 野生菌株Y-389的产酶能力研究 | 第51-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-59页 |
| 4 普鲁兰酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第59-72页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-60页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第59-60页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第60页 |
| 4.1.3 培养基与贮液 | 第60页 |
| 4.1.4 实验菌株与质粒 | 第60页 |
| 4.2 菌株Y-389普鲁兰酶基因的克隆与测序 | 第60-64页 |
| 4.2.1 野生菌株Y-389的系统发育分析 | 第60-61页 |
| 4.2.2 普鲁兰酶编码基因的克隆 | 第61-64页 |
| 4.3 普鲁兰酶基因的生物信息学分析 | 第64页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第64-71页 |
| 4.4.1 野生菌株Y-389的进化分析结果 | 第64-65页 |
| 4.4.2 Alteromonas sp.Y-389基因组的提取及普鲁兰酶基因的克隆 | 第65-66页 |
| 4.4.3 普鲁兰酶基因的生物信息学分析结果 | 第66-71页 |
| 4.5 小结 | 第71-72页 |
| 5 普鲁兰酶基因的异源表达及酶学性质研究 | 第72-86页 |
| 5.1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第72-73页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第73页 |
| 5.1.3 培养基与贮液 | 第73-74页 |
| 5.1.4 实验质粒 | 第74-75页 |
| 5.2 普鲁兰酶基因的表达研究 | 第75-79页 |
| 5.2.1 普鲁兰酶基因表达系统的构建 | 第75-76页 |
| 5.2.2 普鲁兰酶基因的诱导表达 | 第76-77页 |
| 5.2.3 重组菌株中目的蛋白的纯化 | 第77页 |
| 5.2.4 重组普鲁兰酶比活力的测定 | 第77-79页 |
| 5.3 普鲁兰酶的酶学性质分析 | 第79-80页 |
| 5.3.1 重组普鲁兰酶的最适pH分析 | 第79页 |
| 5.3.2 重组普鲁兰酶的最适温度分析 | 第79页 |
| 5.3.3 金属离子对重组普鲁兰酶的酶活力影响 | 第79页 |
| 5.3.4 重组普鲁兰酶降解产物分析 | 第79页 |
| 5.3.5 酶反应动力学参数的测量 | 第79-80页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第80-85页 |
| 5.4.1 异源表达系统的构建 | 第80页 |
| 5.4.2 普鲁兰酶在重组菌株中的诱导表达 | 第80-81页 |
| 5.4.3 普鲁兰酶的纯化及酶比活力的测定 | 第81页 |
| 5.4.4 重组普鲁兰酶的酶学性质分析 | 第81-85页 |
| 5.5 小结 | 第85-86页 |
| 6 总结与展望 | 第86-89页 |
| 论文创新点 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-95页 |
| 附录Ⅰ | 第95-97页 |
| 附录Ⅱ | 第97-100页 |
| 附录Ⅲ | 第100-101页 |
| 硕士期间发表论文及专利 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |