| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 LEA蛋白的研究现状 | 第13-17页 |
| 1.1.1 LEA蛋白的分类 | 第14-16页 |
| 1.1.2 LEA蛋白的定位 | 第16页 |
| 1.1.3 LEA蛋白的功能 | 第16-17页 |
| 1.2 LEAⅡ蛋白研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2.1 LEAⅡ蛋白的功能 | 第17页 |
| 1.2.2 脱水素蛋白互作研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 蛋白互作研究方法 | 第18-21页 |
| 1.3.1 Pull-down技术 | 第18-19页 |
| 1.3.2 免疫共沉淀 | 第19页 |
| 1.3.3 酵母双杂交技术 | 第19-20页 |
| 1.3.4 双分子荧光互补技术 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 小麦WZY1-2、WZY2互作蛋白的筛选 | 第22-43页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌种、载体 | 第22页 |
| 2.1.3 引物 | 第22-23页 |
| 2.2 试剂及培养基 | 第23-24页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基的配置 | 第23页 |
| 2.2.3 常用缓冲液及试剂配置 | 第23-24页 |
| 2.3 实验步骤和方法 | 第24-28页 |
| 2.3.1 植物材料培养 | 第24页 |
| 2.3.2 小麦叶片总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第24页 |
| 2.3.3 小麦WZY1-2、WZY2基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.3.4 原核表达载体PGEX6P-1-WZY1-2、PGEX6P-1-WZY2的构建 | 第25页 |
| 2.3.5 重组蛋白PGEX6P-1-WZY1-2、PGEX6P-1-WZY2表达条件优化 | 第25-26页 |
| 2.3.6 GST Pull-down筛选WZY1-2、WZY2的互作蛋白 | 第26页 |
| 2.3.7 质谱鉴定及互作蛋白的筛选与生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.3.8 酵母双杂交验证 | 第26-28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-41页 |
| 2.4.1 原核表达载体PGEX6P-1-WZY1-2、PGEX6P-1-WZY2的构建与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.4.2 重组蛋白PGEX6P-1-WZY1-2、PGEX6P-1-WZY2最佳表达条件的筛选 | 第30-32页 |
| 2.4.3 GST Pull-down筛选及质谱鉴定 | 第32-37页 |
| 2.4.4 生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 2.4.5 酵母双杂交验证 | 第38-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 酵母双杂交筛选WZY1-2、WZY2互作蛋白 | 第43-52页 |
| 3.1 材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 材料 | 第43页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第43页 |
| 3.1.3 引物 | 第43-44页 |
| 3.2 试剂及培养基 | 第44-45页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第44页 |
| 3.2.2 培养基的配置 | 第44-45页 |
| 3.3 实验步骤和方法 | 第45-46页 |
| 3.3.1 诱饵载体PGBKT7-WZY2构建、自激活及毒性检测 | 第45页 |
| 3.3.2 Y2HGold(PGBKT7-WZY2)酵母感受态制备 | 第45页 |
| 3.3.3 cDNA文库转化酵母感受态 | 第45页 |
| 3.3.4 cDNA文库筛选 | 第45-46页 |
| 3.3.5 PCR检测阳性菌落及测序结果分析 | 第46页 |
| 3.3.6 猎物载体构建及转化 | 第46页 |
| 3.3.7 互作验证 | 第46页 |
| 3.4 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.4.1 cDNA文库筛选 | 第46-47页 |
| 3.4.2 PCR检测阳性菌落 | 第47-48页 |
| 3.4.3 测序结果分析 | 第48-49页 |
| 3.4.4 对与抗逆相关的靶蛋白进行生物信息学分析 | 第49-50页 |
| 3.4.5 蛋白质的互作验证 | 第50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
