致谢 | 第4-5页 |
中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
缩略语 | 第9-12页 |
1 引言 | 第12-16页 |
2 实验材料与方法 | 第16-30页 |
2.1 实验材料 | 第16-20页 |
2.1.1 细胞系 | 第16页 |
2.1.2 细胞培养试剂 | 第16页 |
2.1.3 细胞转染试剂 | 第16页 |
2.1.4 细胞处理化学物 | 第16页 |
2.1.5 细胞蛋白提取相关试剂 | 第16-17页 |
2.1.6 Western blot相关试剂 | 第17页 |
2.1.7 抗体 | 第17-18页 |
2.1.8 融合蛋白纯化试剂 | 第18页 |
2.1.9 分子克隆及荧光定量PCR试剂 | 第18页 |
2.1.10 SiRNA及PCR引物 | 第18-20页 |
2.1.11 软件和数据库 | 第20页 |
2.2 实验方法 | 第20-30页 |
2.2.1 细胞培养、细胞转染、SiRNA干扰、Adr、LBM、MN-NG处理细胞 | 第20-21页 |
2.2.2 酸抽提法提取组蛋白 | 第21页 |
2.2.3 提取细胞核小体 | 第21页 |
2.2.4 ANTI-FLAG M2 Magnetic Beads免疫共沉淀、抗体免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation) | 第21-22页 |
2.2.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第22-24页 |
2.2.6 原核蛋白表达纯化 | 第24-26页 |
2.2.7 体外去甲基反应 | 第26页 |
2.2.8 免疫荧光 | 第26-27页 |
2.2.9 定点突变 | 第27-28页 |
2.2.10 PCR | 第28-29页 |
2.2.11 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第29页 |
2.2.12 染色质结合与分离组份蛋白的提取 | 第29-30页 |
3 结果 | 第30-53页 |
3.1 JMJD5相互作用蛋白的质谱鉴定 | 第30-33页 |
3.2 JMJD5细胞内核定位机制的研究 | 第33-43页 |
3.2.1 JMJD5核定位的过程依赖于Importin α/β和Transportin-1通路 | 第33-35页 |
3.2.2 Importin α和Transportin-1作用于JMJD5的不同区域 | 第35-36页 |
3.2.3 免疫荧光实验进一步明确核定位序列(NLS)的位置及功能 | 第36-38页 |
3.2.4 JMJD5核定位信号(NLS)上关键氨基酸位点的鉴定 | 第38-40页 |
3.2.5 JMJD5的N端存在出核信号(NES) | 第40-41页 |
3.2.6 核定位功能是JMJD5调控cyclinA1表达所必需的 | 第41-43页 |
3.3 JMJD5与p53的相互作用及在DNA损伤反应中的功能研究 | 第43-53页 |
3.3.1 JMJD5与p53相互作用及关键结合区域的鉴定 | 第43-46页 |
3.3.2 JMJD5与p53相互作用在DNA损伤后减弱 | 第46-48页 |
3.3.3 siRNA干扰JMJD5表达使得p53的靶基因表达上调 | 第48-50页 |
3.3.4 JMJD5可抑制p53对靶基因CDKN1A的转录激活 | 第50-53页 |
4 讨论 | 第53-57页 |
5 结论和展望 | 第57-59页 |
5.1 主要结论 | 第57页 |
5.2 展望 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-63页 |
综述 | 第63-84页 |
参考文献 | 第73-84页 |
作者简历及在学期间取得的科研成果 | 第84页 |