| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第10-22页 |
| 1.1 沼气研究与应用进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 沼气发酵概念 | 第10页 |
| 1.1.2 沼气发酵过程 | 第10-12页 |
| 1.1.3 国外沼气应用进展 | 第12-13页 |
| 1.1.4 国内沼气应用现状 | 第13页 |
| 1.2 低温沼气技术研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1 合理的原料配比 | 第13-14页 |
| 1.2.2 低温发酵添加剂 | 第14页 |
| 1.2.3 沼气池保温和增温措施 | 第14页 |
| 1.3 低温沼气微生物研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1 低温沼气微生物概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 低温微生物的发酵机制 | 第16页 |
| 1.3.3 传统分离培养方法 | 第16-17页 |
| 1.3.4 现代分子生物学方法（非培养方法） | 第17页 |
| 1.4 变性梯度凝胶电泳（DGGE） | 第17-20页 |
| 1.4.1 技术原理 | 第18-19页 |
| 1.4.2 PCR-DGGE 技术在微生物生态学中的应用 | 第19页 |
| 1.4.3 PCR-DGGE 技术常见问题 | 第19-20页 |
| 1.4.4 PCR-DGGE 图谱分析 | 第20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 1.6 研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 耐低温沼气发酵优势菌系的筛选 | 第22-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 活性沼泥样品的采集 | 第22页 |
| 2.1.2 试验装置 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 沼气发酵试验 | 第23-24页 |
| 2.2.2 沼气发酵产气量的测定 | 第24页 |
| 2.2.3 甲烷含量检测 | 第24-25页 |
| 2.2.4 数据分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 2.3.1 不同接种源对总产气量的影响 | 第25-26页 |
| 2.3.2 不同接种源对产气速率的影响 | 第26-27页 |
| 2.3.3 不同接种源对甲烷含量的影响 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 沼泥总 DNA 的提取及 PCR 扩增条件的优化 | 第29-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 沼泥样品 | 第29页 |
| 3.1.2 试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第29-30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-35页 |
| 3.2.1 Protein K-CTAB 提取法 | 第30页 |
| 3.2.2 溶菌酶提取法 | 第30-31页 |
| 3.2.3 试剂盒提取法 | 第31-32页 |
| 3.2.4 总 DNA 的测定 | 第32页 |
| 3.2.5 PCR 扩增条件的优化 | 第32-35页 |
| 3.2.6 PCR 扩增产物检测 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 沼泥总 DNA 的提取 | 第35-36页 |
| 3.3.2 古菌 16S rDNA 扩增条件的优化 | 第36-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 沼泥微生物菌群多样性分析 | 第41-54页 |
| 4.1 试验材料 | 第41页 |
| 4.1.1 试剂 | 第41页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-48页 |
| 4.2.1 沼泥中微生物 DNA 的提取 | 第41页 |
| 4.2.2 古菌 16S rDNA 片段扩增 | 第41-42页 |
| 4.2.3 古菌 16S rDNA V3 区片段扩增 | 第42-43页 |
| 4.2.4 PCR 扩增产物的回收 | 第43页 |
| 4.2.5 DGGE 方法的建立 | 第43-46页 |
| 4.2.6 DGGE 图谱分析 | 第46页 |
| 4.2.7 DGGE 图谱条带回收 | 第46页 |
| 4.2.8 回收条带基因的克隆及测序 | 第46-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-53页 |
| 4.3.1 沼泥总 DNA 的提取 | 第48页 |
| 4.3.2 古菌 16S rDNA 片段扩增 | 第48-50页 |
| 4.3.3 DGGE 条件优化结果 | 第50-51页 |
| 4.3.4 DGGE 指纹图谱分析 | 第51-52页 |
| 4.3.5 优势条带的克隆测序 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53页 |
| 4.5 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 实验相关溶液及试剂配制方法 | 第60-62页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
