| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 中英文缩略词 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 水产养殖病害 | 第12-15页 |
| 1.1.1 水产养殖发展现状以及存在的问题 | 第12页 |
| 1.1.2 水产养殖鱼类主要病原菌及其预防 | 第12-15页 |
| 1.2 嗜水气单胞菌的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.1 嗜水气单胞菌的简介 | 第15页 |
| 1.2.2 嗜水气单胞菌的毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.3 细菌sRNA分子伴侣Hfq蛋白的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 Hfq的发现及其主要特征 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Hfq及sRNA分子调控靶基因的作用机制 | 第17-19页 |
| 1.3.3 Hfq对细菌的多向性调控作用 | 第19-20页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第20-22页 |
| 2 嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验 | 第22-30页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 病原菌的采集 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 细菌的分离与纯化 | 第23页 |
| 2.2.2 培养特性观察 | 第23页 |
| 2.2.3 生理生化鉴定 | 第23页 |
| 2.2.4 16S rRNA基因序列测定与比对分析 | 第23-24页 |
| 2.2.5 系统发育树的构建 | 第24页 |
| 2.2.6 感染试验 | 第24页 |
| 2.2.7 纸片扩散药物敏感试验 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-28页 |
| 2.3.1 石斑鱼主要病原菌的分离鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.2 分离菌生理生化特性检测 | 第25-26页 |
| 2.3.3 16S rRNA序列的测定与系统进化树分析 | 第26-27页 |
| 2.3.4 感染试验 | 第27-28页 |
| 2.3.5 药敏试验结果 | 第28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 3 嗜水气单胞菌hfq基因的克隆分析与表达 | 第30-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 嗜水气单胞菌hfq基因的克隆与测序分析 | 第30-31页 |
| 3.2.2 嗜水气单胞菌Hfq蛋白结构的预测与分析 | 第31页 |
| 3.2.3 嗜水气单胞菌Hfq蛋白的表达构建 | 第31-33页 |
| 3.3 实验结果 | 第33-37页 |
| 3.3.1 试水气单胞菌hfq基因的克隆与分析 | 第33页 |
| 3.3.2 嗜水气单胞菌Hfq蛋白结构预测分析 | 第33-34页 |
| 3.3.3 不同细菌Hfq核酸和氨基酸的序列比对分析结果 | 第34-35页 |
| 3.3.4 重组表达载体pET28a(+)-hfq的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.5 重组工程菌诱导表达产物的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 4 嗜水气单胞菌△hfq突变株的构建 | 第38-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 4.1.1 菌株和培养条件 | 第38-39页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第40-41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-46页 |
| 4.2.1 实验流程图 | 第41-42页 |
| 4.2.2 引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| 4.2.3 hfq基因无标记框内缺失突变株的构建 | 第43-46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-50页 |
| 4.3.1 △hfq片段上、下游序列的扩增 | 第46-47页 |
| 4.3.2 △hfq片段的扩增和T-A克隆 | 第47-48页 |
| 4.3.3 重组自杀质粒pDM4-△hfq的构建 | 第48-49页 |
| 4.3.4 第一次单交换突变株的筛选 | 第49页 |
| 4.3.5 △hfq框内缺失突变株的筛选 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 5 Hfq对嗜水气单胞菌生理功能及毒力的影响 | 第51-60页 |
| 5.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 5.1.1 菌株 | 第51页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第51-52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 5.2.1 生长曲线的测定 | 第52页 |
| 5.2.2 运动性测定 | 第52页 |
| 5.2.3 胞外蛋白酶活性测定 | 第52-53页 |
| 5.2.4 溶血活性的测定 | 第53页 |
| 5.2.5 环境应激能力测定 | 第53页 |
| 5.2.6 鱼体感染及毒力测定 | 第53页 |
| 5.3 实验结果 | 第53-58页 |
| 5.3.1 Hfq对嗜水气单胞菌生长情况的影响 | 第53-54页 |
| 5.3.2 Hfq对嗜水气单胞菌运动性的调控 | 第54-55页 |
| 5.3.3 Hfq对嗜水气单胞菌胞外蛋白酶活性的调控 | 第55页 |
| 5.3.4 Hfq对嗜水气单胞菌溶血活性的调控 | 第55-56页 |
| 5.3.5 Hfq对嗜水气单胞菌不同环境压力下的生长调控 | 第56-58页 |
| 5.3.6 Hfq对嗜水气单胞菌毒力的影响 | 第58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-60页 |
| 6 结论与展望 | 第60-62页 |
| 6.1 主要结论 | 第60-61页 |
| 6.2 展望 | 第61页 |
| 6.3 创新点 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录A 部分化学试剂配方和培养基配置 | 第71-73页 |
| 附录B 16Sr RNA基因测序结果 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
