| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 精氨酸脱亚胺酶简介 | 第14-17页 |
| 1.1.1 ADI的来源及性质 | 第14-15页 |
| 1.1.2 ADI的用途 | 第15-17页 |
| 1.1.2.1 ADI具有抗癌潜力 | 第15-17页 |
| 1.1.2.2 ADI具有预防龋齿的作用 | 第17页 |
| 1.1.2.3 ADI用于生产L-瓜氨酸 | 第17页 |
| 1.2 精氨酸脱亚胺酶研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1 ADI抗肿瘤研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.2 ADI的突变研究 | 第18-20页 |
| 1.3 聚乙二醇修饰蛋白技术 | 第20-23页 |
| 1.3.1 聚乙二醇修饰方法简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 聚乙二醇修饰精氨酸脱亚胺酶的研究概况 | 第21-23页 |
| 1.4 本课题研究目的 | 第23页 |
| 1.5 研究内容和技术路线 | 第23-25页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第23-24页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第24-25页 |
| 2 精氨酸脱亚胺酶突变位点的设计与构建表达 | 第25-40页 |
| 2.1 材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 主要试剂和耗材 | 第25-26页 |
| 2.1.2 基本溶液的配制 | 第26-27页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 目的基因的获得 | 第29页 |
| 2.2.2 重组质粒pET3a-wADI/mADI的构建及鉴定 | 第29-33页 |
| 2.2.2.1 载体酶切和胶回收 | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 连接反应 | 第31页 |
| 2.2.2.3 感受态细胞（DH5α）制备 | 第31页 |
| 2.2.2.4 连接产物转化 | 第31-32页 |
| 2.2.2.5 重组质粒筛选及鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.3 重组质粒pET3a-wADI/mADI表达 | 第33-36页 |
| 2.2.3.1 表达感受态细胞制备 | 第33-34页 |
| 2.2.3.2 重组质粒pET3a-wADI/mADI的转化及筛选 | 第34页 |
| 2.2.3.3 重组wADI/mADI蛋白摇瓶表达 | 第34页 |
| 2.2.3.4 SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第34-35页 |
| 2.2.3.5 放大培养发酵 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-38页 |
| 2.3.1 重组质粒pET3a-wADI/mADI的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.2 重组质粒pET3a-wADI/mADI表达 | 第37-38页 |
| 2.4 小结 | 第38-40页 |
| 3 突变型精氨酸脱亚胺酶纯化与性质研究 | 第40-53页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.2 主要设备和仪器 | 第41页 |
| 3.2.3 主要缓冲配制 | 第41-42页 |
| 3.3 包涵体前处理研究 | 第42-43页 |
| 3.3.1 高压匀浆破菌研究 | 第42-43页 |
| 3.3.2 包涵体洗涤研究 | 第43页 |
| 3.3.3 变性和复姓研究 | 第43页 |
| 3.4 重组ADI蛋白的纯化研究 | 第43-45页 |
| 3.4.1 DEAE柱层析纯化 | 第43-44页 |
| 3.4.2 Butyl柱层析纯化 | 第44-45页 |
| 3.5 突变体ADI蛋白性质对比研究 | 第45-47页 |
| 3.5.1 纯度检测 | 第45-46页 |
| 3.5.2 Lowry法测定蛋白浓度 | 第46页 |
| 3.5.3 酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.6 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 3.6.1 包涵体前处理结果和分析 | 第47-48页 |
| 3.6.2 重组ADI蛋白的纯化结果和分析 | 第48-49页 |
| 3.6.3 ADI蛋白性质对比结果分析 | 第49-51页 |
| 3.7 本章小结 | 第51-53页 |
| 4 精氨酸脱亚胺酶PEG修饰研究 | 第53-70页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 材料 | 第53-55页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.2 主要设备和仪器 | 第54页 |
| 4.2.3 主要缓冲配制 | 第54-55页 |
| 4.3 方法 | 第55-60页 |
| 4.3.1 不同比例PEG修饰研究： | 第55页 |
| 4.3.2 修饰产物的的纯化 | 第55-56页 |
| 4.3.3 PEG修饰产物的性质研究 | 第56-60页 |
| 4.3.3.1 修饰产物的纯度度检测 | 第56-57页 |
| 4.3.3.2 修饰产物浓度测定 | 第57页 |
| 4.3.3.3 平均修饰度测定及对比分析 | 第57-59页 |
| 4.3.3.4 酶活测定 | 第59-60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-69页 |
| 4.4.1 修饰产物的纯化 | 第60-61页 |
| 4.4.2 PEG修饰产物的性质研究 | 第61-69页 |
| 4.4.2.1 修饰产物的纯度度检测 | 第61-64页 |
| 4.4.2.2 平均修饰度测定及对比分析 | 第64-67页 |
| 4.4.2.4 酶活测定 | 第67-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 5 结论与展望 | 第70-72页 |
| 5.1 结论 | 第70页 |
| 5.2 本文的创新性 | 第70页 |
| 5.3 展望 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第76页 |
