| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 前言 | 第13-24页 |
| 1 水产养殖业的发展现状 | 第13-14页 |
| 2 鳗弧菌 | 第14-21页 |
| ·鳗弧菌的生物学性状 | 第14页 |
| ·鳗弧菌的流行病学 | 第14-15页 |
| ·鳗弧菌的主要致病因子 | 第15-18页 |
| ·毒力质粒(virulence plasmid)和摄铁系统(iron-sequencing system) | 第15-16页 |
| ·溶血素(haemolysin) | 第16-17页 |
| ·鳗弧菌的胞外金属蛋白酶(metalloprotease) | 第17页 |
| ·外膜蛋白(outer membrane protein,OMP) | 第17-18页 |
| ·其他毒力因子 | 第18页 |
| ·近年来鳗弧菌的研究重点和热点 | 第18-21页 |
| ·鳗弧菌DNA文库的构建 | 第18-20页 |
| ·鳗弧菌的密度感应系统 | 第20-21页 |
| 3 溶解细胞壁的糖基转移酶家族(LTs)和MltD | 第21-23页 |
| ·溶解细胞壁的糖基转移酶家族 | 第21-22页 |
| ·膜绑定溶胞壁质转糖酶D(MltD) | 第22-23页 |
| 4 本论文研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 1 材料与方法 | 第24-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第24-25页 |
| ·实验动物和细胞 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26-27页 |
| ·鳗弧菌菌株CW-1 mltD基因全序列的获得 | 第27-34页 |
| ·LAPCR的实验原理 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·鳗弧菌基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·鳗弧菌基因组DNA的消化 | 第28-29页 |
| ·基因组片段与接头连接 | 第29页 |
| ·第一轮PCR反应 | 第29-30页 |
| ·第二轮PCR反应 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增产物的检测及回收 | 第31页 |
| ·PCR扩增产物的连接反应 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·质粒转化感受态细胞及蓝白斑筛选阳性克隆 | 第32页 |
| ·重组质粒pUCm-T的提取和酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·序列拼接 | 第33页 |
| ·鳗弧菌VIB72的mltD基因全序列的获得 | 第33-34页 |
| ·鳗弧菌MltD蛋白的生物信息学预测 | 第34页 |
| ·鳗弧菌MltD蛋白的表达、纯化及活性研究 | 第34-38页 |
| ·鳗弧菌mltD基因表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·重组鳗弧菌CW-1的MltD融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达和SDS-PAGE电泳检测 | 第36页 |
| ·重组鳗弧菌MltD融合蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·Ni-NTA亲和层析柱的处理与再生 | 第37-38页 |
| ·重组鳗弧菌MltD融合蛋白的活性研究 | 第38页 |
| ·鳗弧菌mltD基因突变菌株的构建 | 第38-42页 |
| ·鳗弧菌菌株CW-1 mltD基因同源片段的克隆和鉴定 | 第38-39页 |
| ·构建重组自杀质粒pM2并转化结合菌株 | 第39-40页 |
| ·细菌接合实验 | 第40-41页 |
| ·PCR法鉴定鳗弧菌mltD基因突变株 | 第41-42页 |
| ·鳗弧菌mltD基因突变菌株性质的研究 | 第42-45页 |
| ·生长曲线的测定 | 第42-43页 |
| ·胞外酶活性 | 第43页 |
| ·API 20E检测 | 第43页 |
| ·药敏实验 | 第43页 |
| ·毒力实验 | 第43-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-68页 |
| ·MltD基因的全序列 | 第45-46页 |
| ·鳗弧菌CW-1 mltD基因的序列全长 | 第45页 |
| ·鳗弧菌VIB72 mltD基因的序列全长 | 第45-46页 |
| ·鳗弧菌MltD蛋白的生物信息学预测 | 第46-52页 |
| ·结构分析 | 第46-47页 |
| ·系统进化分析 | 第47-48页 |
| ·物理性质分析 | 第48页 |
| ·跨膜区域及信号肽预测 | 第48-49页 |
| ·抗原决定簇预测 | 第49-50页 |
| ·二级结构预测 | 第50-51页 |
| ·三级结构预测 | 第51-52页 |
| ·鳗弧菌MltD蛋白的表达、纯化及活性研究 | 第52-57页 |
| ·鳗弧菌mltD基因表达载体的构建及鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组鳗弧菌CW-1的MltD融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第53页 |
| ·鳗弧菌MltD蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·重组鳗弧菌MltD融合蛋白的活性研究 | 第54-57页 |
| ·鳗弧菌mltD基因突变菌株的构建 | 第57-59页 |
| ·mltD基因同源片段的的克隆和鉴定 | 第57页 |
| ·突变株的构建 | 第57-58页 |
| ·突变株的鉴定 | 第58-59页 |
| ·鳗弧菌mltD基因突变菌株性质的研究 | 第59-68页 |
| ·鳗弧菌野生株与mltD突变株生长曲线的测定 | 第59-62页 |
| ·胞外酶活性 | 第62-64页 |
| ·API 20E检测 | 第64-65页 |
| ·药敏实验 | 第65页 |
| ·毒力实验 | 第65-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 4 小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 附录Ⅰ 溶液配方 | 第82-84页 |
| 附录Ⅱ LAPCR获得的全部序列 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
| 已发表和投稿的学术论文 | 第87页 |
