| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写词表 | 第9-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 基因组编辑技术 | 第11-12页 |
| 1.1.1 基因组编辑技术简介 | 第11页 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas9技术 | 第11-12页 |
| 1.2 DGKe基因的结构与功能 | 第12-15页 |
| 1.2.1 DGK基因家族 | 第12-15页 |
| 1.2.2 DGKθ基因在糖脂代谢中的作用 | 第15页 |
| 1.3 课题研究意义 | 第15-16页 |
| 1.4 课题技术路线 | 第16-17页 |
| 第2章 基于CRISPR/Cas9的DGKθ基因敲除HepG2细胞系的建立及其体外实验研究 | 第17-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-23页 |
| 2.1.1 细胞、菌株和质粒载体 | 第17页 |
| 2.1.2 材料及试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第18-22页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-36页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第23页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9系统相关质粒载体构建 | 第23-29页 |
| 2.2.3 DGKθ基因敲除HepG2细胞系的建立 | 第29-31页 |
| 2.2.4 MTT法测定细胞增殖 | 第31-32页 |
| 2.2.5 胞内脂质蓄积检测 | 第32页 |
| 2.2.6 细胞内PA与DAG含量测定 | 第32页 |
| 2.2.7 RT-PCR及Western Blot检测 | 第32-36页 |
| 2.2.8 统计学方法 | 第36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-46页 |
| 2.3.1 成功构建Cas9/sgRNA打靶系统 | 第36-38页 |
| 2.3.2 人源DGKθ基因敲除HepG2细胞系的建立 | 第38-41页 |
| 2.3.3 DGKθ基因与细胞增殖的关系 | 第41页 |
| 2.3.4 细胞内脂质分析 | 第41-42页 |
| 2.3.5 mRNA及蛋白水平检测 | 第42-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-49页 |
| 第3章 利用分别携带Tet-on-Cas9及sgRNA的腺病毒探究DGKθ基因在小鼠肝脏脂代谢中的分子机制 | 第49-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 3.1.1 小鼠、细胞、菌株和病毒载体 | 第49页 |
| 3.1.2 材料与试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-57页 |
| 3.2.1 细胞培养及小鼠饲养 | 第50-51页 |
| 3.2.2 Ad5病毒载体的构建及活性鉴定 | 第51-54页 |
| 3.2.3 肝脏DGKθ基因敲低小鼠模型的构建 | 第54页 |
| 3.2.4 血清生化指标检测 | 第54-55页 |
| 3.2.5 肝组织切片染色 | 第55-56页 |
| 3.2.6 RT-PCR检测 | 第56-57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-63页 |
| 3.3.1 携带Cas9与sgRNA的载体鉴定 | 第57-59页 |
| 3.3.2 小鼠肝指数及血清脂蛋白测定 | 第59-60页 |
| 3.3.3 肝组织病理分析 | 第60-62页 |
| 3.3.4 脂代谢相关因子mRNA水平检测 | 第62-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第4章 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第81页 |
