| 中文摘要 | 第6-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-47页 |
| 材料 | 第13-22页 |
| 1. 实验动物 | 第13页 |
| 2. 菌株 | 第13页 |
| 3. 质粒载体 | 第13-16页 |
| 4. 细胞系与培养基 | 第16页 |
| 5. 实验中用到的细胞系 | 第16页 |
| 6. 工具酶及DNA分子量标准 | 第16-17页 |
| 7. 试剂盒 | 第17页 |
| 8. 抗体 | 第17-18页 |
| 9. 主要仪器、设备和软件名称 | 第18页 |
| 10. 引物的设计和合成 | 第18-21页 |
| 11. SIRNA的设计与合成 | 第21-22页 |
| 方法 | 第22-47页 |
| 12. 基因克隆 | 第22-25页 |
| 12.1 目的片断的扩增 | 第22页 |
| 12.2 PCR产物回收 | 第22-23页 |
| 12.3 PCR产物的克隆 | 第23页 |
| 12.4 突变体编码片段的扩增 | 第23-24页 |
| 12.5 质粒转化与提取 | 第24-25页 |
| 12.6 酶切鉴定 | 第25页 |
| 12.7 测序鉴定 | 第25页 |
| 13. 细胞总RNA的提取和反转录 | 第25-27页 |
| 13.1 TRIzol法细胞总RNA提取 | 第25-26页 |
| 13.2 逆转录 | 第26-27页 |
| 14. 细胞培养相关实验 | 第27-28页 |
| 14.1 细胞复苏 | 第27页 |
| 14.2 细胞传代 | 第27页 |
| 14.3 细胞冻存 | 第27-28页 |
| 14.4 细胞转染 | 第28页 |
| 15. 蛋白分析相关实验 | 第28-34页 |
| 15.1 蛋白提取 | 第28-29页 |
| 15.2 蛋白定量 | 第29-30页 |
| 15.3 蛋白电泳、转膜与Western blot | 第30-32页 |
| 15.4 免疫共沉淀实验 | 第32-33页 |
| 15.5 细胞免疫荧光实验 | 第33-34页 |
| 16. 细胞增殖相关实验 | 第34-35页 |
| 16.1 Cell Counting Kit-8(CCK-8)法绘制生长曲线测细胞增殖 | 第34-35页 |
| 16.2 平板克隆形成实验测细胞增殖 | 第35页 |
| 16.3 实验数据处理 | 第35页 |
| 17. 慢病毒稳定细胞系的建立 | 第35-37页 |
| 17.1 重组慢病毒的包装 | 第35-36页 |
| 17.2 慢病毒感染细胞 | 第36页 |
| 17.3 流式分选 | 第36-37页 |
| 18. 串联亲和纯化 | 第37-38页 |
| 19. 体内泛素化 | 第38-39页 |
| 20. 稳定性实验 | 第39-40页 |
| 21. 基因敲除动物模型的制备相关实验 | 第40-44页 |
| 21.1 RNF138条件性基因敲除小鼠制备 | 第40页 |
| 21.2 基因组抽提及小鼠基因型鉴定 | 第40-41页 |
| 21.3 细胞凋TUNEL检测 | 第41页 |
| 21.4 小鼠精母细胞荧光免疫染色 | 第41-42页 |
| 21.5 细胞倍型分析 | 第42页 |
| 21.6 小鼠组织收集和固定 | 第42页 |
| 21.7 精子计数 | 第42页 |
| 21.8 睾丸组织石蜡包埋及切片 | 第42-43页 |
| 21.9 HE染色 | 第43-44页 |
| 22. 转录组测序分析相关实验 | 第44-46页 |
| 22.1 实验流程 | 第44-45页 |
| 22.2 信息分析流程 | 第45-46页 |
| 23. DNA损伤修复相关实验 | 第46-47页 |
| 23.1 激光诱导损伤 | 第46页 |
| 23.2 细胞染色体组分分离 | 第46页 |
| 23.3 彗星实验 | 第46页 |
| 23.4 同源重组效率检测 | 第46-47页 |
| 结果 | 第47-96页 |
| 1. RNF138基因敲除小鼠模型的建立、表型分析、功能和机制研究 | 第47-57页 |
| 1.1 RNF138基因条件性敲除小鼠的制备及鉴定 | 第47-48页 |
| 1.2 基因敲除小鼠打靶载体构建及ES细胞的筛选鉴定 | 第48-49页 |
| 1.3 基因敲除小鼠和条件性敲除小鼠模型的获得和鉴定 | 第49-50页 |
| 1.4 RNF138在小鼠睾丸中的表达和定位 | 第50-51页 |
| 1.5 RNF138基因敲除小鼠睾丸形态分析 | 第51-52页 |
| 1.6 RNF138基因敲除小鼠精子发生组织形态的影响 | 第52-53页 |
| 1.7 RNF138基因敲除对睾丸支持细胞的影响 | 第53页 |
| 1.8 小鼠睾丸支持细胞RNF138敲除对生殖细胞发育的影响 | 第53-54页 |
| 1.9 RNF138基因敲除对精原细胞数量的影响 | 第54页 |
| 1.10 RNF138基因敲除对精母细胞的影响 | 第54-55页 |
| 1.11 小鼠RNF138敲除导致精母细胞减少的原因 | 第55-56页 |
| 1.12 条件性敲除RNF138基因对小鼠生育力的影响 | 第56-57页 |
| 2. 敲除RNF138基因小鼠及对照小鼠睾丸深度测序分析 | 第57-69页 |
| 2.1 测序样本的验证 | 第57页 |
| 2.2 测序组装结果及统计 | 第57-60页 |
| 2.3 基因结构分析 | 第60-61页 |
| 2.4 SSR分析 | 第61-62页 |
| 2.5 基因表达量分析 | 第62-63页 |
| 2.6 RNA-Seq整体质量评估 | 第63-64页 |
| 2.7 差异表达分析 | 第64-66页 |
| 2.8 基因功能注释 | 第66-69页 |
| 3. 泛素连接酶RNF138在同源重组修复通路的功能和机制研究 | 第69-82页 |
| 3.1 RNF138可以被招募到DNA损伤部位 | 第70-71页 |
| 3.2 RNF138可以通过ATM在Ser124磷酸化 | 第71-74页 |
| 3.3 RNF138积累的DNA损伤位点通过其锌指结构域 | 第74-76页 |
| 3.4 RNF138在调控HR修复途径参与 | 第76-77页 |
| 3.5 RNF138参与DNA损伤修复 | 第77-79页 |
| 3.6 RNF138泛素化RAD51D促进同源重组修复 | 第79-82页 |
| 4. 锌指结构CTCF在DNA损伤应答中识别PAR | 第82-96页 |
| 4.1 前言 | 第82页 |
| 4.2 CTCF是DNA损伤反应蛋白可以招募到DNA损伤 | 第82-84页 |
| 4.3 CTCF招募到DNA损伤位点通过PAR介导 | 第84-85页 |
| 4.4 CTCF的ZNF结构域识别PAR | 第85-87页 |
| 4.5 CTCF招募到DNA损伤位点ZNF4-6 | 第87-89页 |
| 4.6 ZNF4-6 CTCF域识别PAR | 第89-91页 |
| 4.7 CTCF与PAR结合和与DNA结合的关系研究 | 第91-92页 |
| 4.8 CTCF参与DNA损伤修复 | 第92-94页 |
| 4.9 介导的DNA损伤的DNA损伤反应中表征DNA损伤修复区域的边界 | 第94-96页 |
| 讨论 | 第96-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-107页 |
| 附录：英汉名词对照 | 第107-108页 |
| 综述 | 第108-126页 |
| 参考文献 | 第117-126页 |
| 博士在读期间论文与会议摘要写作情况 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
