| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 目录 | 第15-18页 |
| 中英文缩略词表 | 第18-20页 |
| 前言 | 第20-24页 |
| 第一部分 LRIG3 在宫颈鳞癌组织中的表达及意义 | 第24-52页 |
| 1.实验材料和试剂 | 第24-28页 |
| 1.1 标本的收集 | 第24-25页 |
| 1.2 主要仪器 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.4 其他试剂 | 第26页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第26-28页 |
| 2.实验方法 | 第28-31页 |
| 2.1 免疫组化检测宫颈鳞癌组织中 LRIG3、EGFR、Ki67 蛋白的表达 | 第28-29页 |
| 2.1.1 免疫组化染色步骤 | 第28-29页 |
| 2.1.2 结果判定 | 第29页 |
| 2.3 原位杂交检测宫颈鳞癌组织中 LRIG3、EGFR、Ki67 mRNA 的表达 | 第29-30页 |
| 2.3.1 实验步骤 | 第29-30页 |
| 2.3.2 结果判定 | 第30页 |
| 2.4 统计方法 | 第30-31页 |
| 3.实验结果 | 第31-44页 |
| 3.1 免疫组化检测不同对象宫颈组织中 LRIG3、EGFR、Ki67 蛋白表达 | 第31-37页 |
| 3.1.1 LRIG3 蛋白在三组不同宫颈组织中表达情况 | 第31-32页 |
| 3.1.2 EGFR 蛋白在三组不同宫颈组织中表达情况 | 第32-34页 |
| 3.1.3 Ki67 蛋白在三组不同宫颈组织中表达情况 | 第34-35页 |
| 3.1.4 LRIG3、EGFR、Ki67 蛋白表达与宫颈鳞癌临床生物学特征的关系 | 第35-36页 |
| 3.1.5 宫颈鳞癌中 LRIG3、EGFR、Ki67 蛋白表达的相关性 | 第36-37页 |
| 3.2 原位杂交检测不同对象宫颈组织中 LRIG3、EGFR、Ki67 mRNA 表达 | 第37-44页 |
| 3.2.1 LRIG3 mRNA 在三组不同宫颈组织中表达情况 | 第37-39页 |
| 3.2.2 EGFR mRNA 在三组不同宫颈组织中表达情况 | 第39-40页 |
| 3.2.3 Ki67 mRNA 在三组不同宫颈组织中表达情况 | 第40-42页 |
| 3.2.4 LRIG3、EGFR、Ki67 mRNA 表达与宫颈鳞癌临床生物学特征的关系 | 第42-43页 |
| 3.2.5 宫颈鳞癌中 LRIG3、EGFR、Ki67 mRNA 表达的相关性 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-51页 |
| 4.1 宫颈癌的研究现状 | 第44-45页 |
| 4.2 LRIG3 在宫颈鳞癌中的表达及意义 | 第45-47页 |
| 4.3 EGFR 在宫颈鳞癌中的表达和意义 | 第47-49页 |
| 4.4 Ki67 在宫颈鳞癌中的表达和意 义 | 第49-50页 |
| 4.5 宫颈鳞癌组织中 LRIG3 和 EGFR、Ki67 表达的关系 | 第50-51页 |
| 5.小结 | 第51-52页 |
| 第二部分 LRIG3 的表达调控对宫颈鳞癌 Hela229 细胞周期、凋亡、侵袭力的影响 | 第52-84页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第52-57页 |
| 1.1. 细胞株 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第53-54页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第54-56页 |
| 1.5 正义及反义 LRIG3 寡核苷酸序列的设计与合成 | 第56页 |
| 1.6 RT-PCR 引物 | 第56-57页 |
| 2. 实验方法 | 第57-65页 |
| 2.1 细胞培养 | 第57页 |
| 2.2 细胞转染 | 第57-58页 |
| 2.2.1 细胞分组培养 | 第57-58页 |
| 2.2.2 反义寡核苷酸转染宫颈鳞癌 Hela229 细胞 | 第58页 |
| 2.3 Western blot 检测各组 LRIG3 和 EGFR 蛋白表达 | 第58-60页 |
| 2.3.1 细胞蛋白的提取 | 第58页 |
| 2.3.2 蛋白标准曲线及样品含量测定 | 第58-59页 |
| 2.3.3 制备电泳凝胶 | 第59页 |
| 2.3.4 电泳 | 第59页 |
| 2.3.5 转膜及抗体孵育 | 第59-60页 |
| 2.3.6 显影，定影 | 第60页 |
| 2.3.7 结果分析、 | 第60页 |
| 2.4 RT-PCR 检测 LRIG3 和 EGFR mRNA 的表达 | 第60-63页 |
| 2.4.1 提取总 RNA | 第60-61页 |
| 2.4.2 LRIG3 和 EGFR 的扩增 | 第61-62页 |
| 2.4.3 PCR 产物的分析 | 第62页 |
| 2.4.4 结果判断 | 第62-63页 |
| 2.5 MTT 法检测细胞生长曲线 | 第63页 |
| 2.6 AnncxinV-FITC/PI 双标记流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第63-64页 |
| 2.7 MTT 法检测细胞基质黏附实验 | 第64页 |
| 2.8 Transwell 小室检测各组细胞的侵袭力 | 第64-65页 |
| 2.9 统计分析 | 第65页 |
| 3.实验结果 | 第65-78页 |
| 3.1 细胞中 LRIG3、EGFR 蛋白的表达 | 第65-67页 |
| 3.1.1 LRIG3 蛋白表达检测结果 | 第65-66页 |
| 3.1.2 EGFR 蛋白表达检测结果 | 第66-67页 |
| 3.2 各组细胞 LRIG3 与 EGFR mRNA 的表达 | 第67-71页 |
| 3.2.1 LRIG3 mRNA 表达检测 | 第67-69页 |
| 3.2.2 EGFR mRNA 表达检测 | 第69-71页 |
| 3.3 LRIG3 反义核苷酸对细胞增殖的影响 | 第71-72页 |
| 3.4 FITC/PI 双标记检测各组细胞凋亡情况 | 第72-74页 |
| 3.5 细胞基质粘附实验结果 | 第74-76页 |
| 3.6 Transwell 侵袭小室检测结果 | 第76-78页 |
| 4 讨论 | 第78-83页 |
| 4.1 反义寡核苷酸技术与宫颈癌分子靶向治疗 | 第78-80页 |
| 4.2 靶向 LRIG3 的 ASODN 对于 Hela229 细胞的影响 | 第80-82页 |
| 4.2.1 LRIG3 ASODN 对 LRIG3 和 EGFR 表达的影响 | 第80-81页 |
| 4.2.2 LRIG3 ASODN 对 Hela229 细胞增值、凋亡的影响 | 第81页 |
| 4.2.3 LRIG3 ASODN 对 Hela229 细胞侵袭的影响 | 第81-82页 |
| 4.3 LRIG3 对宫颈鳞癌发生发展的作用机制探讨 | 第82-83页 |
| 5 小结 | 第83-84页 |
| 第三部分 LRIG3 表达调控对人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤生长的影响 | 第84-98页 |
| 1 实验材料 | 第84-85页 |
| 1.1 实验动物 | 第84页 |
| 1.2 细胞株 | 第84页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第84-85页 |
| 1.4 主要试剂 | 第85页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第85页 |
| 2 实验方法 | 第85-87页 |
| 2.1 建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型 | 第85-86页 |
| 2.1.1 动物饲养 | 第85页 |
| 2.1.2 裸鼠宫颈鳞癌模型的建立 | 第85页 |
| 2.1.3 实验动物分组及给药 | 第85-86页 |
| 2.2 肿瘤组织标本的取材 | 第86页 |
| 2.3 肿瘤组织 HE 染色 | 第86页 |
| 2.4 Western blot 检测各组移植瘤组织中 LRIG3 的蛋白表达 | 第86页 |
| 2.5 RT-PCR 检测各组移植瘤组织中 LRIG3 的 mRNA 表达 | 第86-87页 |
| 2.6 统计分析 | 第87页 |
| 3.实验结果 | 第87-95页 |
| 3.1 裸鼠宫颈鳞癌移植瘤模型的建立 | 第87-90页 |
| 3.2 各组移植瘤生长曲线 | 第90页 |
| 3.3 HE 染色结果 | 第90-93页 |
| 3.3.1 LRIG3 蛋白表达结果 | 第91-92页 |
| 3.3.2 EGFR 蛋白表达结果 | 第92-93页 |
| 3.4 各组裸鼠宫颈鳞癌移植瘤组织中 LRIG3 mRNA 的表达 | 第93-95页 |
| 3.4.1 LRIG3 mRNA 表达结果 | 第93-94页 |
| 3.4.2 EGFR mRNA 表达结果 | 第94-95页 |
| 4 讨论 | 第95-96页 |
| 5 小结 | 第96-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 治疗性核酸分子靶向治疗宫颈癌的研究新进展 | 第105-115页 |
| 参考文献 | 第112-115页 |
| LRIG 基因家族与肿瘤发生发展关系的研究 | 第115-124页 |
| 参考文献 | 第121-124页 |
| 个人简历 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
