以右旋磷霉素为底物微生物转化法制备左旋磷霉素的初步研究
| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13页 |
| 第一章 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 磷霉素的化学结构和理化性质 | 第14-15页 |
| 1.2 磷霉素的抗菌谱与作用机制 | 第15-16页 |
| 1.3 磷霉素的化学合成 | 第16-19页 |
| 1.3.1 环氧化法合成磷霉素 | 第16-17页 |
| 1.3.2 磷霉素的不对称合成 | 第17-19页 |
| 1.4 磷霉素的生物转化 | 第19-22页 |
| 1.5 磷霉素的检测方法 | 第22-23页 |
| 1.5.1 生物鉴定法(微生物检测法) | 第22页 |
| 1.5.2 薄层色谱法 | 第22-23页 |
| 1.5.3 高效液相色谱色谱法 | 第23页 |
| 1.5.4 毛细管电泳检测法 | 第23页 |
| 1.6 磷霉素的药理活性与临床应用 | 第23-25页 |
| 第二章 生物转化菌种的筛选及产物鉴定方法的建立 | 第25-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 培养基 | 第25页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 产物含量标准曲线的绘制 | 第26页 |
| 2.2.2 生物转化菌种的筛选 | 第26页 |
| 2.2.3 产物鉴定方法的建立 | 第26-27页 |
| 2.2.4 固体耐受分离获得优势菌株 | 第27-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-34页 |
| 2.3.1 左旋磷霉素含量的标准曲线绘制 | 第28页 |
| 2.3.2 生物转化菌种的筛选 | 第28-31页 |
| 2.3.3 液体摇瓶复筛及转化产物的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3.4 固体耐受分离获得优势菌株 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 生物转化产物的分离纯化 | 第36-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.1 菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 填料 | 第36页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 最适上样pH的考察 | 第36-37页 |
| 3.2.2 717阴离子树脂最大交换容量的考察 | 第37页 |
| 3.2.3 717阴离子树脂洗脱液的考察 | 第37页 |
| 3.2.4 洗脱曲线的绘制 | 第37页 |
| 3.2.5 转化产物的分离纯化 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-44页 |
| 3.3.1 最适上样pH的考察 | 第38-39页 |
| 3.3.2 717阴离子树脂最大交换容量的考察 | 第39页 |
| 3.3.3 717阴离子树脂洗脱液的考察 | 第39-40页 |
| 3.3.4 洗脱曲线的绘制 | 第40-41页 |
| 3.3.5 转化液中产物的分离纯化 | 第41-44页 |
| 3.4 小结 | 第44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 活性菌株2221的鉴定 | 第45-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 菌株 | 第45页 |
| 4.1.2 引物 | 第45页 |
| 4.1.3 酶与试剂 | 第45页 |
| 4.1.4 培养基 | 第45-46页 |
| 4.1.5 实验仪器 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.2.1 多种阳性菌株初步鉴定 | 第47页 |
| 4.2.2 点种培养法 | 第47页 |
| 4.2.3 插片培养法 | 第47页 |
| 4.2.4 琼脂槽法 | 第47-48页 |
| 4.2.5 制备霉菌浸片 | 第48页 |
| 4.2.6 真菌菌株2221基因组DNA的提取 | 第48页 |
| 4.2.7 ITS-5.8S片段的PCR扩增 | 第48-49页 |
| 4.2.8 PCR产物的纯化 | 第49页 |
| 4.2.9 ITS-5.8S片段的测序 | 第49页 |
| 4.2.10 菌株2221的系统进化树分析 | 第49-50页 |
| 4.2.11 18S片段的测序 | 第50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-59页 |
| 4.3.1 多种阳性菌株的初步鉴定 | 第50-55页 |
| 4.3.2 菌株2221的鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.3 ITS-5.8S序列的进化分析 | 第56-58页 |
| 4.3.4 18S测序结果及比对分析 | 第58-59页 |
| 4.4 小结 | 第59页 |
| 4.5 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 菌种转化工艺的初步研究 | 第61-75页 |
| 5.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 菌种 | 第61页 |
| 5.1.2 试剂 | 第61页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第61页 |
| 5.1.4 培养基 | 第61-62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 培养基葡萄糖含量考察 | 第62页 |
| 5.2.2 种子质量优化 | 第62-63页 |
| 5.2.3 转化条件的优化 | 第63-64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-74页 |
| 5.3.1 培养基葡萄糖含量考察 | 第64-65页 |
| 5.3.2 种子质量优化 | 第65-69页 |
| 5.3.3 转化条件的优化 | 第69-74页 |
| 5.4 小结 | 第74页 |
| 5.5 讨论 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
