| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| 2 研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-40页 |
| 3.1 试验一 哺乳小白鼠乳腺组织乳铁蛋白基因的克隆及序列分析 | 第24-31页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第24-26页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第26-31页 |
| 3.1.2.1 哺乳小白鼠乳腺组织总RNA的提取 | 第26页 |
| 3.1.2.2 甲醛变性电泳 | 第26页 |
| 3.1.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第26-27页 |
| 3.1.2.4 聚合酶链式反应(PCR)扩增 | 第27页 |
| 3.1.2.5 PCR产物电泳 | 第27页 |
| 3.1.2.6 PCR产物割胶回收(QIA quick试剂盒) | 第27-28页 |
| 3.1.2.7 PCR回收产物与pGEM-T easy载体连接 | 第28页 |
| 3.1.2.8 转化 | 第28-29页 |
| 3.1.2.9 重组克隆筛选 | 第29页 |
| 3.1.2.10 PCR鉴定重组克隆 | 第29页 |
| 3.1.2.11 重组DNA核苷酸序列测定分析 | 第29-31页 |
| 3.2 试验二 哺乳小白鼠在不同泌乳阶段乳铁蛋白MRNA表达差异 | 第31-34页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第31页 |
| 3.2.2 试验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.2.1 RNA提取 | 第31页 |
| 3.2.2.2 反转录 | 第31-32页 |
| 3.2.2.3 PCR | 第32-33页 |
| 3.2.2.4 凝胶电泳 | 第33页 |
| 3.2.2.5 电泳图片的获得和定量分析 | 第33-34页 |
| 3.3 试验三 铁对ICR哺乳小白鼠LF基因表达的影响 | 第34-40页 |
| 3.3.1 体外试验 | 第34-37页 |
| (1) 铁(FeSO_4)对哺乳小白鼠乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.1.1 试验材料 | 第34页 |
| 3.3.1.2 试验方法 | 第34-35页 |
| 3.3.1.2.1 细胞分离和培养 | 第34-35页 |
| 3.3.1.2.2 不同浓度硫酸亚铁处理 | 第35页 |
| 3.3.1.2.3 MTT法检测 | 第35页 |
| 3.3.1.2.4 统计分析 | 第35页 |
| (2) 铁对哺乳小白鼠乳铁蛋白基因表达的影响 | 第35-37页 |
| 3.3.1.3 试验材料 | 第35-36页 |
| 3.3.1.3.1 细胞培养 | 第35-36页 |
| 3.3.1.3.2 其它 | 第36页 |
| 3.3.1.4 试验方法 | 第36-37页 |
| 3.3.1.4.1 细胞分离和培养 | 第36页 |
| 3.3.1.4.2 细胞总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.3.1.4.3 检测铁(硫酸亚铁)对哺乳小白鼠LF基因表达的影响 | 第37页 |
| 3.3.2 体内试验 | 第37-40页 |
| 3.3.2.1 试验材料 | 第37-38页 |
| 3.3.2.2 试验方法 | 第38-40页 |
| 3.3.2.2.1 试验分组 | 第38页 |
| 3.3.2.2.2 试验饲粮配合 | 第38-39页 |
| 3.3.2.2.3 屠宰试验 | 第39页 |
| 3.3.2.2.4 检测铁对乳铁蛋白(LF)mRNA表达的影响 | 第39页 |
| 3.3.2.2.5 统计分析 | 第39-40页 |
| 4 试验结果 | 第40-52页 |
| 4.1 试验一 哺乳小白鼠乳铁蛋白基因克隆及测序结果 | 第40-42页 |
| 4.1.1 哺乳小白鼠乳铁蛋白(mLF)PCR产物电泳结果 | 第40页 |
| 4.1.2 质粒DNA PCR检验结果 | 第40-41页 |
| 4.1.3 小白鼠乳铁蛋白基因片段测序结果 | 第41-42页 |
| 4.2 试验二 哺乳小白鼠在不同泌乳阶段乳腺组织乳铁蛋白基因表达的差异 | 第42-46页 |
| 4.2.1 循环数对平台期影响 | 第42-43页 |
| 4.2.2 对小白鼠乳铁蛋白mRNA定量的结果 | 第43-46页 |
| 4.3 试验三 铁对ICR小鼠LF基因表达的影响 | 第46-52页 |
| 4.3.1 体外试验 | 第46-50页 |
| (1) 铁(FeSO_4)对哺乳小白鼠乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第46-47页 |
| (2) 铁对小鼠LF基因表达的影响 | 第47-50页 |
| 4.3.2 体内试验 | 第50-52页 |
| 5 讨论 | 第52-56页 |
| 5.1 小白鼠乳铁蛋白基因克隆 | 第52页 |
| 5.2 定量RT-PCR法的构建 | 第52-53页 |
| 5.3 哺乳小白鼠在不同泌乳阶段乳铁蛋白MRNA表达差异 | 第53页 |
| 5.4 铁对ICR小白鼠乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| 5.5 铁对哺乳小白鼠乳铁蛋白基因表达的影响 | 第54-56页 |
| 6 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| Abstract | 第65页 |
| 附录 | 第67页 |
