| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-14页 |
| 1. 手足口病流行病学 | 第7-8页 |
| 2. 肠道病毒71型 | 第8-10页 |
| 3. 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 | 第10-13页 |
| 4. 类病毒颗粒及相关疫苗 | 第13页 |
| 5. 研究目的和预期 | 第13-14页 |
| 1. 实验材料 | 第14-15页 |
| ·细胞、病毒、菌株及质粒 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·基因 | 第15页 |
| 2. 实验方法 | 第15-27页 |
| ·引物设计和合成 | 第15页 |
| ·获得P1和3CD基因片段 | 第15-17页 |
| ·P1和3CD基因的PCR扩增 | 第15-16页 |
| ·PCR结果鉴定及其产物胶回收 | 第16页 |
| ·P1和3CD基因的胶回收产物双酶切 | 第16-17页 |
| ·P1和3CD酶切产物的鉴定和胶回收 | 第17页 |
| ·构建供体质粒pFastBac Dual-P1-3CD | 第17-20页 |
| ·pFastBac Dual质粒双酶切(Sal Ⅰ& HindⅢ)产物鉴定和胶回收 | 第18页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第18页 |
| ·P1酶切产物和pFastBac Dual质粒酶切产物的连接及转化 | 第18-19页 |
| ·获得pFastBac Dual-P1质粒 | 第19页 |
| ·pFastBac Dual-P1质粒双酶切(Sma Ⅰ& Kpn Ⅰ)产物鉴定和胶回收 | 第19-20页 |
| ·3CD酶切产物和pFastBac Dual-P1质粒酶切产物的连接、转化及鉴定 | 第20页 |
| ·构建穿梭质粒Bac-P1-3CD | 第20-23页 |
| ·DH10感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| ·pFastBac Dual-P1-3CD转化DH10感受态细胞 | 第21页 |
| ·重组杆状质粒的提取 | 第21-22页 |
| ·重组杆状质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| ·昆虫细胞Sf9的培养 | 第23页 |
| ·重组杆状病毒的包装 | 第23-25页 |
| ·转染昆虫细胞Sf9 | 第23-24页 |
| ·重组杆状病毒鉴定 | 第24-25页 |
| ·收获重组杆状病毒 | 第25页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第25页 |
| ·目的基因表达的检测 | 第25-27页 |
| ·SDS-PAGE | 第25-26页 |
| ·Western blot | 第26页 |
| ·类病毒颗粒的电镜检测 | 第26-27页 |
| 3. 实验结果 | 第27-33页 |
| ·P1基因和3CD基因的获得 | 第27页 |
| ·pFastBac Dual-P1质粒的构建 | 第27页 |
| ·pFastBac Dual-P1-3CD质粒的构建 | 第27页 |
| ·Bac-P1-3CD质粒的构建 | 第27页 |
| ·重组杆状病毒的包装 | 第27-28页 |
| ·目的基因表达检测 | 第28页 |
| ·EV71类病毒颗粒检测 | 第28-33页 |
| 4. 讨论 | 第33-36页 |
| ·重组杆状病毒的包装 | 第33页 |
| ·目的基因的表达与EV71类病毒颗粒检测 | 第33-34页 |
| ·重组杆状病毒的滴度测定 | 第34-35页 |
| ·EV71类病毒颗粒的纯化 | 第35-36页 |
| 5. 小结 | 第36页 |
| 6. 展望 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-39页 |
| 综述 | 第39-50页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56-57页 |
