| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第10-24页 |
| 1 细菌载体治疗肿瘤的研究概述 | 第10-14页 |
| 1.1 细菌载体治疗肿瘤的研究背景 | 第10-11页 |
| 1.2 细菌载体治疗肿瘤的优势 | 第11-12页 |
| 1.3 细菌介导的传递系统的优化 | 第12-13页 |
| 1.4 细菌载体治疗肿瘤的研究现状 | 第13-14页 |
| 2 益生型大肠杆菌Nissle1917的研究背景 | 第14-16页 |
| 2.1 益生型大肠杆菌Nissle1917的研究现状 | 第14-15页 |
| 2.2 大肠杆菌Nissle1917作为细菌载体治疗肿瘤的优势 | 第15-16页 |
| 3 天青蛋白抗肿瘤的研究背景 | 第16-18页 |
| 3.1 天青蛋白概述 | 第16-17页 |
| 3.2 天青蛋白的抗肿瘤作用 | 第17-18页 |
| 4 构建侵袭性大肠杆菌的研究背景 | 第18-19页 |
| 5 Red/ET同源重组 | 第19-22页 |
| 5.1 Red/ET同源重组的原理 | 第19-20页 |
| 5.2 影响Red/ET同源重组效率的因素 | 第20-21页 |
| 5.3 Red/ET同源重组的应用 | 第21-22页 |
| 6 立题依据和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-35页 |
| 1 材料 | 第24-29页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 1.2 引物 | 第25页 |
| 1.3 培养基和抗生素 | 第25-26页 |
| 1.4 试剂 | 第26-27页 |
| 1.5 反应体系 | 第27-28页 |
| 1.6 仪器与设备 | 第28-29页 |
| 1.7 实验动物和细胞 | 第29页 |
| 2. 方法 | 第29-35页 |
| 2.1 pelB-azurin-kan基因的扩增及测序 | 第29-30页 |
| 2.2 Red/ET重组插入pelB-azurin-kan基因 | 第30-31页 |
| 2.3 质粒pBlu-inv-hly-gfp构建和转化 | 第31-32页 |
| 2.4 pelB-azurin的表达及免疫印迹杂交鉴定(Western Blotting)分析 | 第32-33页 |
| 2.5 工程菌E.coli Nissle1917 VB侵染性观察 | 第33-34页 |
| 2.6 工程菌株菌经瘤内注射在荷瘤小鼠内的分布情况试验 | 第34页 |
| 2.7 工程菌抑瘤实验 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-43页 |
| 1 大肠杆菌Nissle1917 VA的构建 | 第35-36页 |
| 1.1 pelB-azurin-kan基因的克隆及测序 | 第35页 |
| 1.2 EcN VA的鉴定 | 第35-36页 |
| 2 大肠杆菌NISSLE1917 VB的构建 | 第36-38页 |
| 2.1 pBlu-inv-hly-gfp的构建 | 第36-37页 |
| 2.2 大肠杆菌Nissle1917 VB的鉴定 | 第37-38页 |
| 3 外源Azurin基因的表达及Western Blotting检测 | 第38-40页 |
| 4 工程菌E.coli Nissle 1917 VB侵染性观察 | 第40页 |
| 5 瘤内及正常组织中的活菌计数 | 第40-41页 |
| 6 工程菌的抗肿瘤效果 | 第41-43页 |
| 6.1 野生型EcN和工程菌对荷瘤小鼠C57体重的影响 | 第41页 |
| 6.2 野生型EcN和工程菌对荷瘤小鼠C57肿瘤体积的影响 | 第41-43页 |
| 第四章 讨论 | 第43-48页 |
| 1 载体菌株的选择 | 第43页 |
| 2 外源基因的克隆与分泌表达 | 第43-44页 |
| 3 细菌侵袭性影响的分析 | 第44页 |
| 4 瘤内及正常组织中的活菌计数 | 第44-45页 |
| 5 工程菌抑瘤实验分析 | 第45页 |
| 6 主要结论和今后的研究设想 | 第45-48页 |
| 6.1 主要结论 | 第45-46页 |
| 6.2 今后的研究设想 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 本论文受资助的基金项目 | 第58-59页 |
| 硕士期间撰写和发表的与本课题相关的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
