目录 | 第4-7页 |
英文缩略词(Abbreviations) | 第7-12页 |
第一部分:MEKK1高表达细胞模型的建立及鉴定 | 第12-62页 |
中文摘要 | 第13-14页 |
英文摘要 | 第14-15页 |
前言 | 第15-16页 |
实验材料 | 第16-19页 |
实验方法 | 第19-25页 |
实验结果 | 第25-38页 |
1.流式细胞术检测M1B16中MEKK1的表达 | 第25-26页 |
2.MEKK1基因对B16细胞软琼脂集落形成能力的影响 | 第26页 |
3.MEKK1基因对B16细胞形态的影响 | 第26-28页 |
4.MEKK1基因对B16细胞粘附能力的影响 | 第28页 |
5.MEKK1基因对B16细胞中Calpain-1活性的影响 | 第28-29页 |
6.MEKK1基因对细胞运动能力的影响(划痕-愈合分析实验) | 第29页 |
7.MEKK1基因对B16细胞侵袭能力的影响 | 第29-32页 |
8.MEKK1基因对B16细胞致瘤性的影响 | 第32页 |
9.MEKK1基因对B16细胞侵袭转移能力的影响 | 第32-37页 |
10.MEKK1基因对B16细胞药物反应性的影响 | 第37-38页 |
结论 | 第38-39页 |
讨论 | 第39-43页 |
参考文献 | 第43-47页 |
综述:MEKK1在细胞信号传导中的作用 | 第47-62页 |
第二部分:酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞内MEKK1表达量方法的建立及应用 | 第62-105页 |
中文摘要 | 第63-64页 |
英文摘要 | 第64-65页 |
前言 | 第65-66页 |
实验材料 | 第66-69页 |
实验方法 | 第69-77页 |
实验结果 | 第77-98页 |
一、MEKK1催化结构域原核表达载体的构建,融合蛋白的表达和纯化 | 第77-85页 |
1.表达载体pET32-deltaM的构建 | 第77-81页 |
2.pET32-deltaMEKK1在大肠杆菌中的表达和鉴定 | 第81页 |
3.deltaMEKK1表达条件的优化 | 第81-84页 |
4.deltaMEKK1融合蛋白的纯化 | 第84-85页 |
二、MEKK1多克隆抗血清的制备和鉴定 | 第85-87页 |
三、直接竞争ELISA法测定MEKK1方法的建立 | 第87-94页 |
1.交叉连续稀释法确定最佳试剂浓度 | 第87页 |
2.检测限(detection limit),定量限(quantitation limit)和线性关系(linearity) | 第87-89页 |
3.精密度 | 第89-90页 |
4.回收率 | 第90-94页 |
四、细胞株中MEKK1表达水平的测定 | 第94-98页 |
1.转染质粒pcDNA3-MEKK1的细胞株中MEKK1表达水平的变化 | 第94页 |
2.常见细胞系中MEKK1表达水平的测定 | 第94-98页 |
结论 | 第98-99页 |
讨论 | 第99-102页 |
参考文献 | 第102-105页 |
第三部分:非那吲哚里西丁类生物碱CAT的抗肿瘤作用及机制研究 | 第105-161页 |
中文摘要 | 第106-108页 |
英文摘要 | 第108-110页 |
前言 | 第110-112页 |
实验材料 | 第112-113页 |
实验方法 | 第113-121页 |
实验结果 | 第121-146页 |
一、CAT在体外抑制肿瘤细胞增殖作用 | 第121-126页 |
二、CAT对人肝癌细胞Bel7402细胞周期的作用及其机理研究 | 第126-130页 |
1.CAT对人肝癌细胞Bel7402细胞周期的作用 | 第126-129页 |
2.CAT在体外对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的影响 | 第129-130页 |
三、CAT抗肿瘤细胞侵袭转移作用及其机理研究 | 第130-136页 |
1.CAT对B16-BL6细胞侵袭穿过重组基质膜能力的影响 | 第130-133页 |
2.CAT对B16-BL6细胞粘附能力的影响 | 第133-134页 |
3.CAT对HT-1080细胞分泌基质金属蛋白酶能力的影响 | 第134-136页 |
四、CAT的抗血管生成作用及其机理研究 | 第136-146页 |
1.CAT对ECV304细胞增殖的抑制作用 | 第136页 |
2.CAT对ECV304细胞穿过重组基质膜能力的影响 | 第136-139页 |
3.CAT对ECV304细胞分泌基质金属蛋白酶能力的影响 | 第139页 |
4.CAT对ECV304细胞体外管腔形成能力的抑制作用 | 第139-143页 |
5.CAT对ECV304细胞相关基因表达的影响 | 第143-146页 |
结论 | 第146-147页 |
讨论 | 第147-155页 |
参考文献 | 第155-161页 |
综述:基质金属蛋白酶与肿瘤的侵袭和转移 | 第161-173页 |
参考文献 | 第171-173页 |
附录:溶液配制 | 第173-178页 |
致谢 | 第178-180页 |
个人简历 | 第180-182页 |