| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 引言 | 第10-15页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 小麦赤霉病危害概况 | 第10-11页 |
| 1.1.2 禾谷镰刀菌生物学性质 | 第11-12页 |
| 1.2 细胞凋亡与类半胱天冬氨酸酶 | 第12-13页 |
| 1.2.1 细胞凋亡 | 第12页 |
| 1.2.2 类半胱氨酸天冬蛋白酶 | 第12-13页 |
| 1.3 真菌中metacaspase研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 研究目的意义 | 第14-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-22页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第15页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第15页 |
| 2.1.3 酶和生化试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第16-19页 |
| 2.1.5 培养基配制 | 第19-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-44页 |
| 2.2.1 | 第22-28页 |
| 2.2.1.1 禾谷镰刀菌的保存和培养 | 第22页 |
| 2.2.1.2 禾谷镰刀菌分生孢子的收集 | 第22页 |
| 2.2.1.3 大肠杆菌的热激转化 | 第22-23页 |
| 2.2.1.4 目的基因片段的回收 | 第23页 |
| 2.2.1.5 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.2.1.6 禾谷镰刀菌FgMCA基因的确定和引物设计 | 第23-25页 |
| 2.2.1.7 禾谷镰刀菌FgMCA1和FgMCA2结构域分析 | 第25-26页 |
| 2.2.1.8 禾谷镰刀菌基因组DNA提取 | 第26页 |
| 2.2.1.9 禾谷镰刀菌RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.1.10 cDNA链合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2 禾谷镰刀菌FgMCA基因敲除载体的构建过程 | 第28-31页 |
| 2.2.2.1 敲除载体构建过程和原理 | 第28-29页 |
| 2.2.2.2 FgMCA1和FgMCA2基因敲除载体构建 | 第29-31页 |
| 2.2.3 禾谷镰刀菌FgMCA基因敲除 | 第31-34页 |
| 2.2.3.1 原生质体制备 | 第31-32页 |
| 2.2.3.2 原生质体的转化 | 第32-33页 |
| 2.2.3.3 敲除转化子的筛选 | 第33页 |
| 2.2.3.4 敲除转化子的PCR验证 | 第33页 |
| 2.2.3.5 RT-PCR验证敲除转化子 | 第33-34页 |
| 2.2.3.5 Southern blot验证敲除转化子 | 第34页 |
| 2.2.4 回复载体构建过程和亚细胞定位 | 第34-39页 |
| 2.2.4.1 基因的回复和亚细胞定位引物的设计 | 第34页 |
| 2.2.4.2 引物设计 | 第34页 |
| 2.2.4.3 基因片段的扩增与质粒酶切 | 第34-38页 |
| 2.2.4.4 大肠杆菌质粒的提取 | 第38页 |
| 2.2.4.5 原生质体的转化 | 第38页 |
| 2.2.4.6 转化子的筛选 | 第38页 |
| 2.2.4.7 激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位 | 第38-39页 |
| 2.2.5 敲除和回复菌株表型分析 | 第39-40页 |
| 2.2.5.1 菌落形态观察与生长速度测定 | 第39页 |
| 2.2.5.2 菌丝末端分支观察 | 第39页 |
| 2.2.5.3 无性生殖测定 | 第39页 |
| 2.2.5.4 无性孢子形态观察 | 第39-40页 |
| 2.2.5.5 分生孢子萌发 | 第40页 |
| 2.2.5.6 氧胁迫下的敏感性测定 | 第40页 |
| 2.2.6 菌丝凋亡检测（TUNEL）分析： | 第40-41页 |
| 2.2.7 致病性测定 | 第41-42页 |
| 2.2.8 DON毒素产量提取与测定 | 第42页 |
| 2.2.9 麦角甾醇的提取与测定 | 第42-43页 |
| 2.2.10 产毒基因表达量测定 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-60页 |
| 3.1 禾谷镰刀菌FgMCA结构分析 | 第44页 |
| 3.1.1 禾谷镰刀菌metacaspase基因的获得 | 第44页 |
| 3.1.2 FgMCAs基因的详细信息 | 第44页 |
| 3.2 结构域和多序列比对分析 | 第44-47页 |
| 3.3 禾谷镰刀菌FgMCA敲除突变体的获得 | 第47-51页 |
| 3.3.1 敲除载体构建过程 | 第47-48页 |
| 3.3.2 敲除突变体验证 | 第48-51页 |
| 3.4 禾谷镰刀菌FgMCA回复菌株的构建 | 第51页 |
| 3.4.1 回复载体构建过程 | 第51页 |
| 3.4.2 回复菌株的验证 | 第51页 |
| 3.5 FgMCA基因敲除突变体的表型观察 | 第51-54页 |
| 3.5.1 FgMCA调控菌落形态和菌落生长速度 | 第51-52页 |
| 3.5.2 FgMCA调控分生孢子形成 | 第52-54页 |
| 3.6 FgMCA调控菌株致病性 | 第54-56页 |
| 3.6.1 小麦穗部接种实验 | 第54-55页 |
| 3.6.2 玉米须接种实验 | 第55-56页 |
| 3.7 FgMCA调控DON毒素生物合成与TRI基因表达 | 第56-57页 |
| 3.8 FgMCA调控抗氧化胁迫敏感性 | 第57-58页 |
| 3.9 FgMCA调控细胞凋亡 | 第58页 |
| 3.10 FgMCA亚细胞定位于细胞质中 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 6 研究展望 | 第63-64页 |
| 参考文献： | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 硕士期间发表的文章情况 | 第69页 |
