| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTARCT | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-19页 |
| 1.1 牛支原体的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 牛支原体分类地位及形态特征 | 第14页 |
| 1.1.2 培养特性与生物学特征 | 第14-15页 |
| 1.1.3 流行病学 | 第15-16页 |
| 1.1.4 致病机理 | 第16页 |
| 1.2 牛支原体诊断方法的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 病原学诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.2.2 血清学诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.3 牛支原体主要表面蛋白与靶标抗原 | 第18页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 P48蛋白的原核表达及反应原性鉴定 | 第19-25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株和血清 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第19页 |
| 2.1.3 主要溶液及配置 | 第19页 |
| 2.1.4 p48基因的获取及优化合成 | 第19-20页 |
| 2.1.5 重组表达质粒pET32a(+)-p48的鉴定 | 第20页 |
| 2.1.6 重组表达质粒pET32a(+)-p48的转化 | 第20页 |
| 2.1.7 P48重组蛋白的表达 | 第20页 |
| 2.1.8 P48重组蛋白的纯化 | 第20-21页 |
| 2.1.9 Western-blot检测 | 第21页 |
| 2.2 实验结果 | 第21-24页 |
| 2.2.1 p48基因的优化 | 第21-22页 |
| 2.2.2 重组表达质粒的鉴定 | 第22页 |
| 2.2.3 P48重组蛋白的表达分析 | 第22-23页 |
| 2.2.4 P48重组蛋白的纯化鉴定 | 第23页 |
| 2.2.5 Western-blot检测结果 | 第23-24页 |
| 2.3 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章M. bovis抗体间接血凝检测方法的建立 | 第25-31页 |
| 3.1 材料与方法 | 第25-27页 |
| 3.1.1 血清来源 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 醛化-鞣酸化绵羊红细胞 | 第25-26页 |
| 3.1.4 P48重组蛋白抗原的致敏 | 第26页 |
| 3.1.5 间接血凝试验操作步骤与结果判定 | 第26页 |
| 3.1.6 P48重组蛋白最适致敏浓度的选择 | 第26页 |
| 3.1.7 判定标准试验 | 第26页 |
| 3.1.8 特异性、敏感性、重复性试验 | 第26页 |
| 3.1.9 田间样品的检测 | 第26-27页 |
| 3.2 实验结果 | 第27-29页 |
| 3.2.1 P48重组蛋白最适致敏浓度的选择 | 第27页 |
| 3.2.2 血凝效价的判定标准 | 第27-28页 |
| 3.2.3 特异性试验 | 第28页 |
| 3.2.4 敏感性试验 | 第28页 |
| 3.2.5 重复性试验 | 第28-29页 |
| 3.2.6 田间样品的检测 | 第29页 |
| 3.3 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 胶体金免疫层析技术检测M. bovis抗体方法的建立 | 第31-38页 |
| 4.1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 4.1.1 主要试剂与仪器 | 第31页 |
| 4.1.2 胶体金溶液的制备 | 第31页 |
| 4.1.3 胶体金标记P48重组蛋白最适pH的确定 | 第31-32页 |
| 4.1.4 胶体金标记P48重组蛋白最适抗原浓度的确定 | 第32页 |
| 4.1.5 胶体金免疫层析试纸条的制备、组装 | 第32页 |
| 4.1.6 试纸条的检测及结果判定 | 第32-33页 |
| 4.1.7 特异性、敏感性、重复性试验 | 第33页 |
| 4.1.8 田间样品的检测 | 第33页 |
| 4.2 实验结果 | 第33-36页 |
| 4.2.1 胶体金标记P48重组蛋白最适pH的选择 | 第33页 |
| 4.2.2 胶体金标记P48重组蛋白最适抗原浓度的选择 | 第33页 |
| 4.2.3 胶体金免疫层析试纸条的组装、检测及结果判定 | 第33-34页 |
| 4.2.4 特异性试验 | 第34-35页 |
| 4.2.5 敏感性试验 | 第35-36页 |
| 4.2.6 重复性试验 | 第36页 |
| 4.2.7 田间样品的检测 | 第36页 |
| 4.3 讨论 | 第36-38页 |
| 4.3.1 胶体金制备过程的影响因素 | 第36页 |
| 4.3.2 胶体金标记过程的影响因素 | 第36-37页 |
| 4.3.3 硝酸纤维素膜的选择 | 第37页 |
| 4.3.4 血清稀释度的选择 | 第37页 |
| 4.3.5 试纸条检测效果评价 | 第37-38页 |
| 第五章 试剂盒生产用菌种（DE3-Mb-P48）种子批的建立 | 第38-49页 |
| 5.1 材料和方法 | 第38-40页 |
| 5.1.1 材料 | 第38页 |
| 5.1.2 原始种子批的建立 | 第38页 |
| 5.1.3 原始种子批的鉴定 | 第38-39页 |
| 5.1.4 原始种子批的保存期 | 第39页 |
| 5.1.5 基础种子批的建立 | 第39页 |
| 5.1.6 基础种子批的鉴定 | 第39-40页 |
| 5.1.7 基础种子批的最高代次鉴定 | 第40页 |
| 5.1.8 基础种子批的保存期 | 第40页 |
| 5.2 实验结果 | 第40-48页 |
| 5.2.1 原始种子批的鉴定 | 第40-42页 |
| 5.2.2 原始种子的保存 | 第42-44页 |
| 5.2.3 基础种子批的鉴定 | 第44页 |
| 5.2.4 基础种子批的最高代次的鉴定 | 第44-46页 |
| 5.2.5 基础种子的保存 | 第46-48页 |
| 5.3 讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 标准阴、阳性血清的制备及检验 | 第49-56页 |
| 6.1 材料 | 第49页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第49页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第49页 |
| 6.2 标准阳性血清的制备 | 第49-50页 |
| 6.2.1 免疫原制备 | 第49页 |
| 6.2.2 弗氏完全和不完全佐剂抗原的配置 | 第49页 |
| 6.2.3 免疫程序 | 第49页 |
| 6.2.4 试血 | 第49-50页 |
| 6.2.5 采血及提取血清 | 第50页 |
| 6.2.6 分装与冻干 | 第50页 |
| 6.2.7 阳性血清的检验 | 第50页 |
| 6.3 标准阴性血清的制备 | 第50-51页 |
| 6.3.1 制造用动物 | 第50页 |
| 6.3.2 血清制造 | 第50页 |
| 6.3.3 成品检验 | 第50-51页 |
| 6.4 实验结果 | 第51-54页 |
| 6.4.1 标准阳性血清的制备及检验 | 第51-53页 |
| 6.4.2 标准阴性血清的制备及检验 | 第53-54页 |
| 6.5 讨论 | 第54-56页 |
| 第七章 两种试剂盒的实验室试制及质量研究 | 第56-66页 |
| 7.1 材料和方法 | 第56-58页 |
| 7.1.1 主要试剂和检验用血清来源 | 第56页 |
| 7.1.2 P48重组蛋白的制备 | 第56页 |
| 7.1.3 IHA抗原的试制 | 第56-57页 |
| 7.1.4 IHA抗原的实验室效果评价 | 第57页 |
| 7.1.5 ICS的试制 | 第57页 |
| 7.1.6 ICS的实验室效果评价 | 第57-58页 |
| 7.2 实验结果 | 第58-65页 |
| 7.2.1 P48重组蛋白的制备 | 第58页 |
| 7.2.2 IHA抗原的特异性分析 | 第58页 |
| 7.2.3 IHA敏感性分析 | 第58-60页 |
| 7.2.4 重复性试验 | 第60页 |
| 7.2.5 IHA抗原的保存期 | 第60-62页 |
| 7.2.6 ICS的特异性分析 | 第62页 |
| 7.2.7 ICS的敏感性分析 | 第62-63页 |
| 7.2.8 ICS的重复性试验 | 第63-64页 |
| 7.2.9 ICS的保存期 | 第64-65页 |
| 7.3 讨论 | 第65-66页 |
| 第八章 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
