中文摘要 | 第8-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
1 前言 | 第14-21页 |
1.1 猪圆环病毒 | 第14-16页 |
1.1.1 猪圆环病毒2型(PCV2)的特征 | 第14-15页 |
1.1.2 猪群中PCV2的一般流行病学 | 第15-16页 |
1.2 miRNA的研究进展 | 第16-18页 |
1.2.1 miRNA的生物合成 | 第16-17页 |
1.2.2 miRNA的作用机制 | 第17页 |
1.2.3 miRNA的调控 | 第17-18页 |
1.3 miRNA与病毒的感染 | 第18-19页 |
1.3.1 miRNA与PCV2的关系 | 第19页 |
1.4 miR-122 的研究进展 | 第19-20页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
2 材料与方法 | 第21-43页 |
2.1 实验材料 | 第21-25页 |
2.1.1 实验动物及样品采集 | 第21页 |
2.1.2 猪基因组来源 | 第21页 |
2.1.3 细胞来源 | 第21页 |
2.1.4 毒株 | 第21-22页 |
2.1.5 主演实验仪器和设备 | 第22-23页 |
2.1.6 主要试剂及来源 | 第23-24页 |
2.1.7 主要数据库及生物学软件 | 第24页 |
2.1.8 常用试剂的配制 | 第24-25页 |
2.2 实验方法 | 第25-42页 |
2.2.0 引物序列及Tm值 | 第25-26页 |
2.2.1 总RNA的提取 | 第26-28页 |
2.2.2 RNA检测和浓度的测定 | 第28页 |
2.2.3 RNA反转录获得cDNA | 第28页 |
2.2.4 实时荧光定量PCR | 第28-30页 |
2.2.5 总蛋白的提取和浓度测定 | 第30-31页 |
2.2.6 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印记分析(Western blotting) | 第31-33页 |
2.2.7 猪基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
2.2.9 猪miR-122 启动子区的调控分析 | 第34-41页 |
2.2.10 猪miR-122启动子处的多肽性位点的检测 | 第41-42页 |
2.3 统计分析 | 第42-43页 |
3 结果和分析 | 第43-59页 |
3.1 总RNA的提取质量鉴定 | 第43页 |
3.2 猪miR-122 的表达分析 | 第43-49页 |
3.2.1 荧光定量PCR | 第43-45页 |
3.2.2 莱芜猪和大长杂交猪不同组织中miR-122 的表达分析 | 第45-46页 |
3.2.3 miR-122 靶基因的验证 | 第46-49页 |
3.3 蛋白水平上验证靶基因NFAT5和NPEPPS的表达变化 | 第49-50页 |
3.3.1 蛋白浓度的测定 | 第49页 |
3.3.2 miR-122 过表达前后NFAT5和NPEPPS的蛋白表达变化 | 第49-50页 |
3.4 ssc-miR-122 的表达调控分析 | 第50-57页 |
3.4.1 ssc-miR-122 的启动子区荧光素酶表达载体的构建 | 第50-52页 |
3.4.2 不同片段长度启动子的双荧光素酶活性检测 | 第52-53页 |
3.4.3 miR-122 启动子区多态性位点的查找及群体水平的检测 | 第53-57页 |
3.5 ssc-miR-122 对PCV2病毒复制的效应 | 第57-59页 |
4 讨论 | 第59-63页 |
4.1 猪的miR-122 的功能分析讨论 | 第59-61页 |
4.2 猪的miR-122 启动子的调控分析讨论 | 第61-63页 |
5 结论 | 第63-64页 |
6 参考文献 | 第64-72页 |
7 致谢 | 第72-73页 |
8 攻读硕士期间发表论文情况 | 第73页 |