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猪miR-122的靶基因鉴定、转录调控及其对PCV2复制的效应

中文摘要第8-11页
Abstract第11-13页
1 前言第14-21页
    1.1 猪圆环病毒第14-16页
        1.1.1 猪圆环病毒2型(PCV2)的特征第14-15页
        1.1.2 猪群中PCV2的一般流行病学第15-16页
    1.2 miRNA的研究进展第16-18页
        1.2.1 miRNA的生物合成第16-17页
        1.2.2 miRNA的作用机制第17页
        1.2.3 miRNA的调控第17-18页
    1.3 miRNA与病毒的感染第18-19页
        1.3.1 miRNA与PCV2的关系第19页
    1.4 miR-122 的研究进展第19-20页
    1.5 本研究的目的和意义第20-21页
2 材料与方法第21-43页
    2.1 实验材料第21-25页
        2.1.1 实验动物及样品采集第21页
        2.1.2 猪基因组来源第21页
        2.1.3 细胞来源第21页
        2.1.4 毒株第21-22页
        2.1.5 主演实验仪器和设备第22-23页
        2.1.6 主要试剂及来源第23-24页
        2.1.7 主要数据库及生物学软件第24页
        2.1.8 常用试剂的配制第24-25页
    2.2 实验方法第25-42页
        2.2.0 引物序列及Tm值第25-26页
        2.2.1 总RNA的提取第26-28页
        2.2.2 RNA检测和浓度的测定第28页
        2.2.3 RNA反转录获得cDNA第28页
        2.2.4 实时荧光定量PCR第28-30页
        2.2.5 总蛋白的提取和浓度测定第30-31页
        2.2.6 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印记分析(Western blotting)第31-33页
        2.2.7 猪基因组DNA的提取第33-34页
        2.2.9 猪miR-122 启动子区的调控分析第34-41页
        2.2.10 猪miR-122启动子处的多肽性位点的检测第41-42页
    2.3 统计分析第42-43页
3 结果和分析第43-59页
    3.1 总RNA的提取质量鉴定第43页
    3.2 猪miR-122 的表达分析第43-49页
        3.2.1 荧光定量PCR第43-45页
        3.2.2 莱芜猪和大长杂交猪不同组织中miR-122 的表达分析第45-46页
        3.2.3 miR-122 靶基因的验证第46-49页
    3.3 蛋白水平上验证靶基因NFAT5和NPEPPS的表达变化第49-50页
        3.3.1 蛋白浓度的测定第49页
        3.3.2 miR-122 过表达前后NFAT5和NPEPPS的蛋白表达变化第49-50页
    3.4 ssc-miR-122 的表达调控分析第50-57页
        3.4.1 ssc-miR-122 的启动子区荧光素酶表达载体的构建第50-52页
        3.4.2 不同片段长度启动子的双荧光素酶活性检测第52-53页
        3.4.3 miR-122 启动子区多态性位点的查找及群体水平的检测第53-57页
    3.5 ssc-miR-122 对PCV2病毒复制的效应第57-59页
4 讨论第59-63页
    4.1 猪的miR-122 的功能分析讨论第59-61页
    4.2 猪的miR-122 启动子的调控分析讨论第61-63页
5 结论第63-64页
6 参考文献第64-72页
7 致谢第72-73页
8 攻读硕士期间发表论文情况第73页

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