| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 丝状真菌蛋白分泌 | 第12-14页 |
| 1.1.1 内质网 | 第13页 |
| 1.1.2 高尔基体 | 第13页 |
| 1.1.3 囊泡转运 | 第13-14页 |
| 1.2 丝状真菌的未折叠蛋白响应 | 第14-16页 |
| 1.3 Hac1基因 | 第16页 |
| 1.4 染色质免疫共沉淀技术 | 第16-20页 |
| 1.4.1 ChIP的原理和步骤 | 第17-18页 |
| 1.4.2 ChIP-Seq测序分析 | 第18-20页 |
| 1.5 研究的目标意义 | 第20页 |
| 1.6 研究内容 | 第20页 |
| 1.7 技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 DTT诱发UPR响应时间点的确定 | 第22-32页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 主要溶液、试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 菌丝体及发酵液的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 蛋白浓度测定 | 第24-25页 |
| 2.2.3 基因转录水平检测 | 第25-27页 |
| 2.3 结果分析 | 第27-31页 |
| 2.3.1 蛋白浓度测定 | 第27-29页 |
| 2.3.2 加DTT后斜卧青霉基因组总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR检测bipA和pdiA的表达量 | 第29-31页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 斜卧青霉染色质免疫共沉淀超声波破碎方法的建立 | 第32-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 培养基 | 第32页 |
| 3.1.3 试剂及仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-34页 |
| 3.2.1 菌丝体制备 | 第33页 |
| 3.2.2 甲醛交联 | 第33页 |
| 3.2.3 DNA超声波破碎 | 第33页 |
| 3.2.4 解交联染色体的检验 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-38页 |
| 3.3.1 最佳交联时间的确定 | 第34-35页 |
| 3.3.2 最佳菌悬液浓度的确定 | 第35-36页 |
| 3.3.3 染色质免疫共沉淀超声条件的确定 | 第36-38页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 斜卧青霉染色质免疫共沉淀及测序分析 | 第40-53页 |
| 4.1 试验材料 | 第40页 |
| 4.1.1 菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂及仪器 | 第40页 |
| 4.2 试验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 菌丝体的制备方法同 3.2.1 | 第40页 |
| 4.2.2 甲醛交联方法同 3.2.2 | 第40页 |
| 4.2.3 DNA超声波破碎方法同 3.2.3 | 第40页 |
| 4.2.4 染色质免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| 4.2.5 解交联 | 第41页 |
| 4.2.6 DNA纯化及检测 | 第41页 |
| 4.2.7 RAPD-PCR扩增靶基因结合序列 | 第41-42页 |
| 4.2.8 染色质免疫共沉淀样品测序及数据分析 | 第42-43页 |
| 4.3 试验结果 | 第43-51页 |
| 4.3.1 染色质免疫共沉淀及DNA纯化检测 | 第43页 |
| 4.3.2 RAPD-PCR扩增靶基因结合序列 | 第43-44页 |
| 4.3.3 染色质免疫共沉淀测序数据分析 | 第44-51页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 Hac1靶基因3379敲除菌株的构建 | 第53-64页 |
| 5.1 试验材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第53页 |
| 5.1.2 培养基 | 第53-54页 |
| 5.1.3 常用缓冲液、试剂 | 第54页 |
| 5.2 试验方法 | 第54-57页 |
| 5.2.1 敲除盒的构建 | 第54-55页 |
| 5.2.2 原生质体的制备及转化 | 第55-56页 |
| 5.2.3 转化子的染色体基因组的提取 | 第56页 |
| 5.2.4 敲除子筛选 | 第56页 |
| 5.2.5 蛋白浓度及酶活测定 | 第56-57页 |
| 5.3 结果分析 | 第57-63页 |
| 5.3.1 敲除载体的构建 | 第57-59页 |
| 5.3.2 原生质体的转化和敲除子的鉴定 | 第59-60页 |
| 5.3.3 敲除子3379与出发菌株 114-2 的形态学比较 | 第60-61页 |
| 5.3.4 敲除菌株3379的蛋白浓度及酶活测定 | 第61-63页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第63-64页 |
| 第六章 主要结论 | 第64-66页 |
| 6.1 主要结论 | 第64-65页 |
| 6.2 研究不足 | 第65页 |
| 6.3 研究展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
