| 中文摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 英文略语表 | 第18-20页 |
| 序言 | 第20-21页 |
| 第一部分 H5N1型禽流感病毒导致急性肺损伤机理的研究和临床防治药物的筛选 | 第21-89页 |
| 第一节 RAS系统在H5N1型禽流感病毒导致急性肺损伤过程中的研究 | 第22-58页 |
| 前言 | 第22-25页 |
| 1. 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1. 实验动物 | 第25页 |
| 1.2. 实验试剂 | 第25页 |
| 1.2.1. 试剂盒 | 第25页 |
| 1.2.2. 细胞株 | 第25页 |
| 1.2.3. 病毒株 | 第25页 |
| 1.2.4. H5N1禽流感病毒蛋白表达质粒 | 第25页 |
| 1.3. 主要生化试剂和抗体 | 第25-26页 |
| 1.4. 细胞培养及转染试剂 | 第26页 |
| 1.5. 主要使用药物 | 第26页 |
| 2. 主要实验设备 | 第26-27页 |
| 3. 主要溶液配置 | 第27页 |
| 3.1. 细胞冻存液的配制 | 第27页 |
| 3.2. 细胞裂解液的配制 | 第27页 |
| 3.3. SDS-PAGE蛋白质电泳及相关缓冲液的配制 | 第27页 |
| 3.4. 常用缓冲液的配置 | 第27页 |
| 4. 实验方法 | 第27-41页 |
| 4.1. H5N1禽流感病毒感染患者和健康对照者入组和基本信息 | 第27-28页 |
| 4.2. 人血浆AngⅡ的测定 | 第28-29页 |
| 4.3. 小鼠血浆AngⅡ的测定 | 第29-31页 |
| 4.4. 小鼠肺组织病毒50%培养组织感染剂量(TCID_(50))的测定 | 第31-32页 |
| 4.4.1. 流感病毒TCID_(50)测定组肺组织样品收取和处理 | 第31-32页 |
| 4.4.2. 流感病毒50%培养组织感染剂量(TCID_(50))的测定 | 第32页 |
| 4.5. 小鼠肺组织RNA收取和基因表达变化检测 | 第32-35页 |
| 4.5.1. 肺组织样品收取和处理 | 第32-33页 |
| 4.5.2. 小鼠肺组织样品RNA提取 | 第33-34页 |
| 4.5.3. RNA逆转录成cDNA | 第34页 |
| 4.5.4. 荧光实时定量PCR检测目的基因的表达变化 | 第34-35页 |
| 4.6. 小鼠肺组织湿干重量比测定 | 第35-36页 |
| 4.7. 小鼠肺组织病理检测及炎性浸润细胞计数和肺损伤程度评分 | 第36-37页 |
| 4.8. 细胞转染质粒 | 第37页 |
| 4.9. 细胞RNA样品收取和荧光实时定量PCR检测 | 第37-38页 |
| 4.9.1. 细胞RNA样品收取和处理 | 第38页 |
| 4.9.2. 荧光实时定量PCR检测Ace2基因变化 | 第38页 |
| 4.10. 细胞和肺组织蛋白样品收取和Western Blotting检测 | 第38-41页 |
| 4.10.1. 细胞蛋白样品收取和处理 | 第38页 |
| 4.10.2. 肺组织蛋白样品收取和处理 | 第38-39页 |
| 4.10.3. 细胞和组织蛋白样品浓度测定和调整 | 第39-40页 |
| 4.10.4. Western blotting检测 | 第40-41页 |
| 4.11. 小鼠生存率检测 | 第41页 |
| 5. 实验结果 | 第41-55页 |
| 5.1. H5N1病毒感染病人血清中Ang Ⅱ水平升高 | 第41-42页 |
| 5.2. H5N1病毒感染死亡病人Ang Ⅱ表达持续升高 | 第42-43页 |
| 5.3. H5N1病毒感染死亡小鼠Ang Ⅱ表达持续升高 | 第43-44页 |
| 5.4. Ace2基因敲除有利于病毒基因复制 | 第44页 |
| 5.5. Ace2基因敲除小鼠肺组织中病毒含量更高 | 第44-45页 |
| 5.6. 注射ACE2蛋白可以降低病毒复制 | 第45-46页 |
| 5.7. 注射ACE2蛋白可以降低Ang Ⅱ表达 | 第46页 |
| 5.8. ACE2蛋白单独治疗可以改善小鼠肺水肿程度 | 第46-47页 |
| 5.9. ACE2蛋白单独治疗可以改善小鼠肺组织病理损伤程度 | 第47-48页 |
| 5.10. ACE2蛋白单独治疗可以降低Ang Ⅱ表达 | 第48页 |
| 5.11. 单个H5N1病毒蛋白对Ace2 mRNA表达水平没有影响 | 第48-49页 |
| 5.12. 单个H5N1病毒蛋白对ACE2蛋白表达水平没有影响 | 第49-50页 |
| 5.13. 使用氯沙坦治疗可以显著提高小鼠生存率 | 第50-51页 |
| 5.14. 使用氯沙坦治疗可以改善小鼠肺水肿程度 | 第51-52页 |
| 5.15. 使用氯沙坦治疗可以改善小鼠肺组织病理损伤程度 | 第52页 |
| 5.16. 使用氯沙坦治疗对H5N1病毒复制没有影响 | 第52-53页 |
| 5.17. 使用氯沙坦治疗可降低肺组织ⅡL-6表达量 | 第53-54页 |
| 5.18. 使用氯沙坦治疗可促进RAS稳态平衡 | 第54-55页 |
| 6. 实验结论 | 第55-56页 |
| 7. 讨论 | 第56-58页 |
| 第二节 H5N1型禽流感病毒导致急性肺损伤的候选临床治疗药物筛选 | 第58-89页 |
| 前言 | 第58-60页 |
| 1. 实验材料 | 第60页 |
| 1.1. 实验动物 | 第60页 |
| 1.2. 实验试剂 | 第60页 |
| 1.2.1. 试剂盒 | 第60页 |
| 1.2.2. 细胞株 | 第60页 |
| 1.2.3. 病毒株 | 第60页 |
| 1.3. 主要生化试剂和抗体 | 第60页 |
| 1.4. 细胞培养及转染试剂 | 第60页 |
| 1.5. 主要使用药物 | 第60页 |
| 2. 主要实验设备 | 第60-61页 |
| 3. 主要溶液配置 | 第61-62页 |
| 3.1. 细胞冻存液的配制 | 第61页 |
| 3.2. 细胞裂解液的配制 | 第61页 |
| 3.3. SDS-PAGE蛋白质电泳及相关缓冲液的配制 | 第61-62页 |
| 3.4. 常用缓冲液的配置 | 第62页 |
| 4. 实验方法 | 第62-71页 |
| 4.1. 氯喹预防或治疗H5N1病毒感染A549细胞的细胞活力测定 | 第62-63页 |
| 4.2. 小鼠生存率检测和体重变化统计 | 第63-64页 |
| 4.3. 小鼠肺组织湿干重量比测定 | 第64页 |
| 4.4. 小鼠肺组织病理检测及炎性浸润细胞计数 | 第64-65页 |
| 4.5. qRT-PCR检测小鼠肺组织mRNA表达变化 | 第65-68页 |
| 4.5.1. 肺组织样品收取和处理 | 第65-66页 |
| 4.5.2. 小鼠肺组织样品RNA提取 | 第66页 |
| 4.5.3. RNA逆转录成cDNA | 第66-67页 |
| 4.5.4. 荧光实时定量PCR检测目的基因的表达变化 | 第67-68页 |
| 4.6. Western Blotting检测小鼠肺组织蛋白表达变化 | 第68-71页 |
| 4.6.1. 肺组织蛋白样品收取和处理 | 第68-69页 |
| 4.6.2. 细胞和组织蛋白样品浓度测定和调整 | 第69-70页 |
| 4.6.3. Western blotting检测 | 第70-71页 |
| 5. 实验结果 | 第71-86页 |
| 5.1. 氯喹可挽救H5N1型禽流感病毒导致的细胞死亡 | 第71-72页 |
| 5.2. 氯喹预防给药不能明显提高小鼠生存率 | 第72页 |
| 5.3. 氯喹预防给药不能明显改善小鼠肺水肿程度 | 第72-73页 |
| 5.4. 氯喹预防给药不能明显改善小鼠肺组织病理损伤程度 | 第73-74页 |
| 5.5. 氯喹治疗给药可以明显提高小鼠生存率 | 第74页 |
| 5.6. 氯喹治疗给药可以明显改善小鼠肺水肿程度 | 第74-75页 |
| 5.7. 氯喹治疗给药可以明显改善小鼠肺组织病理损伤程度 | 第75-76页 |
| 5.8. 氯喹治疗给药后小鼠肺组织自噬程度显著降低 | 第76页 |
| 5.9. 氯喹治疗给药后对H5N1病毒复制没有影响 | 第76-77页 |
| 5.10. 使用氯喹治疗不能降低肺组织炎性因子表达量 | 第77-78页 |
| 5.11. H5N1型禽流感病毒滴鼻感染小鼠模型生存率 | 第78-79页 |
| 5.12. H5N1型禽流感病毒滴鼻感染小鼠模型体重变化 | 第79页 |
| 5.13. 依那普利治疗不能显著提高小鼠生存率 | 第79-80页 |
| 5.14. 依那普利治疗不能缓解小鼠体重下降 | 第80-81页 |
| 5.15. 依那普利治疗不能显著缓解小鼠肺水肿 | 第81页 |
| 5.16. 卡托普利治疗不能显著提高小鼠生存率 | 第81-82页 |
| 5.17. 卡托普利治疗不能缓解小鼠体重下降 | 第82页 |
| 5.18. 卡托普利治疗不能缓解小鼠肺水肿 | 第82-83页 |
| 5.19. 辛伐他汀治疗不能显著提高小鼠生存率 | 第83页 |
| 5.20. 辛伐他汀治疗不能缓解小鼠体重下降 | 第83-84页 |
| 5.21. 辛伐他汀治疗不能缓解小鼠肺水肿 | 第84页 |
| 5.22. 普伐他汀治疗不能缓解小鼠肺水肿 | 第84-85页 |
| 5.23. 普伐他汀和氯沙坦联合治疗不能缓解小鼠肺水肿 | 第85-86页 |
| 6. 结论 | 第86-87页 |
| 7. 讨论 | 第87-89页 |
| 第二部分 氧化铜(CuO)纳米颗粒可引起A549细胞产生自噬性的细胞死亡 | 第89-108页 |
| 前言 | 第90-91页 |
| 1. 实验材料 | 第91-92页 |
| 1.1. 实验试剂 | 第91页 |
| 1.1.1. 试剂盒 | 第91页 |
| 1.1.2. 细胞株 | 第91页 |
| 1.1.3. LC3-GFP2表达质粒 | 第91页 |
| 1.2. 主要生化试剂和抗体 | 第91页 |
| 1.3 细胞培养及转染试剂 | 第91页 |
| 1.4 纳米颗粒和药物 | 第91-92页 |
| 2. 主要实验设备 | 第92页 |
| 3. 主要溶液配置 | 第92-93页 |
| 3.1. 细胞冻存液的配制 | 第92页 |
| 3.2. 电镜样品固定液的配置 | 第92-93页 |
| 3.3. 常用缓冲液的配置 | 第93页 |
| 3.4. 细胞裂解液的配制 | 第93页 |
| 3.5. SDS-PAGE蛋白质电泳及相关缓冲液的配制 | 第93页 |
| 4. 实验方法 | 第93-99页 |
| 4.1. 氧化铜纳米颗粒感染A549细胞后细胞活力检测 | 第93-94页 |
| 4.2. 氧化铜纳米颗粒感染A549细胞电镜观察 | 第94-95页 |
| 4.3. 氧化铜纳米颗粒感染A549细胞荧光共聚焦显微镜观察 | 第95-96页 |
| 4.4. 氧化铜纳米颗粒引起A549细胞自噬潮现象检测 | 第96-99页 |
| 4.4.1. BFA1处理细胞蛋白样品收集 | 第96页 |
| 4.4.2. 蛋白样品浓度测定与调整 | 第96-97页 |
| 4.4.3. Western blotting检测自噬潮现象 | 第97-98页 |
| 4.4.4. Western blotting定量分析 | 第98-99页 |
| 4.5. Atg 5基因siRNA转染实验 | 第99页 |
| 5. 实验结果 | 第99-106页 |
| 5.1. 氧化铜纳米颗粒可导致A549细胞死亡且呈梯度效应 | 第100页 |
| 5.2. 氧化铜纳米颗粒可增加A549细胞中的自噬小泡 | 第100-101页 |
| 5.3. 氧化铜纳米颗粒可促进LC3蛋白聚集 | 第101-102页 |
| 5.4. 氧化铜纳米颗粒可引起自噬潮 | 第102-103页 |
| 5.5. 敲低Atg 5基因可挽救氧化铜纳米颗粒导致的细胞死亡 | 第103页 |
| 5.6. 敲低Atg 5基因可降低细胞自噬程度 | 第103-104页 |
| 5.7. 敲低Atg 5基因可挽救氧化铜纳米颗粒导致的细胞死亡 | 第104-105页 |
| 5.8. 自噬抑制剂可挽救氧化铜纳米颗粒导致的细胞死亡 | 第105-106页 |
| 6. 结论 | 第106-107页 |
| 7. 讨论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-116页 |
| 综述 | 第116-132页 |
| 参考文献 | 第123-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 个人简历 | 第133-136页 |
