| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第1章 综述 | 第13-21页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 CRISPR概述 | 第13页 |
| 1.3 CRISPR/Cas系统结构组成 | 第13-14页 |
| 1.4 CRISPR/Cas系统的主要类型 | 第14页 |
| 1.5 CRISPR/Cas系统的功能 | 第14-16页 |
| 1.5.1 适应阶段 | 第15页 |
| 1.5.2 表达 | 第15页 |
| 1.5.3 干扰 | 第15-16页 |
| 1.6 CRISPR/Cas系统的应用 | 第16页 |
| 1.6.1 Cas蛋白被用于基因组编辑 | 第16页 |
| 1.6.2 Cas蛋白应用于转录调控 | 第16页 |
| 1.7 CRISR与噬菌体的共进化 | 第16-17页 |
| 1.8 CRISPR/Cas关于基因调控的研究 | 第17-19页 |
| 1.8.1 调控病原菌毒力 | 第17-18页 |
| 1.8.2 反义CRISPR RNA的调控作用 | 第18页 |
| 1.8.3 基因调控可能的机制 | 第18-19页 |
| 1.9 结核分枝杆菌中的CRISPR | 第19页 |
| 1.10 展望 | 第19-21页 |
| 第2章 前言 | 第21-23页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第23-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和细胞 | 第23页 |
| 3.1.2 主要试剂和材料 | 第23-24页 |
| 3.1.3 培养基及主要试剂的配置 | 第24-25页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-37页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌H37Rv基因组的提取：CTAB法 | 第26页 |
| 3.2.2 结核分枝杆菌Rv2816c基因PCR引物的设计与合成 | 第26页 |
| 3.2.3 结核分枝杆菌Rv2816c基因扩增 | 第26页 |
| 3.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化(热激法) | 第26-27页 |
| 3.2.5 Rv2816c基因的TA克隆 | 第27页 |
| 3.2.6 pALACE-Rv2816c穿梭载体构建 | 第27-28页 |
| 3.2.7 耻垢分枝杆菌感受态的制备及电转化 | 第28-29页 |
| 3.2.8 重组质粒在耻垢分枝杆菌中的表达及验证 | 第29-30页 |
| 3.2.9 菌落形态观察 | 第30页 |
| 3.2.10 生长曲线的测定 | 第30页 |
| 3.2.11 滑动实验 | 第30页 |
| 3.2.12 耻垢分枝杆菌生物膜培养方法 | 第30页 |
| 3.2.13 耻垢分枝杆菌脂肪酸分析 | 第30-31页 |
| 3.2.14 氧化压力的耐受性检测 | 第31页 |
| 3.2.15 SDS耐受性检测 | 第31页 |
| 3.2.16 酸耐受性检测 | 第31-32页 |
| 3.2.17 Trizol法提取耻垢分枝杆菌总RNA | 第32页 |
| 3.2.18 Rv2816c对相关基因转录水平的影响 | 第32-34页 |
| 3.2.19 耻垢分枝杆菌侵染巨噬细胞后存活率检测 | 第34-35页 |
| 3.2.20 巨噬细胞被重组耻垢分枝杆菌侵染后总RNA的提取 | 第35页 |
| 3.2.21 定量RT-PCR检测M semgmatis-pALACE-Rv2816c侵染THP-1巨噬细胞后相关细胞因子转录水平 | 第35-37页 |
| 第4章 结果与分析 | 第37-51页 |
| 4.1 Cas2在致病分枝杆菌中是保守蛋白 | 第37页 |
| 4.2 Rv2816c基因的PCR扩增及鉴定 | 第37-38页 |
| 4.3 构建M. smegmatis-pALACE-Rv2816c重组耻垢分枝杆菌 | 第38-39页 |
| 4.4 Rv2816c基因在重组耻垢分枝杆菌中表达 | 第39页 |
| 4.5 过表达Rv2816c基因使耻垢分枝杆菌的生长速度加快 | 第39-40页 |
| 4.6 Rv2816c基因的过表达使耻垢分枝杆菌单菌落形态发生改变 | 第40页 |
| 4.7 重组分枝杆菌的滑动能力降低 | 第40-41页 |
| 4.8 过表达Rv2816c基因影响耻垢分枝杆菌生物膜的形成 | 第41-42页 |
| 4.9 过表达Rv2816c基因对耻垢分枝杆菌中的脂质成分无太大影响 | 第42页 |
| 4.10 过表达Rv2816c基因使耻垢分枝杆菌对SDS敏感 | 第42-43页 |
| 4.11 过表达Rv2816c基因使耻垢分枝杆菌对氧化压力更敏感 | 第43-44页 |
| 4.12 M. smegmatis-pALACE-Rv2816c对压力条件的敏感由Sigma因子介导 | 第44-45页 |
| 4.13 过表达Rv2816c基因使耻垢分枝杆菌对氧氟沙星和诺氟沙星敏感且是由活性氧介导的 | 第45-46页 |
| 4.14 过表达Rv2816c基因使耻垢分枝杆菌对酸性条件敏感 | 第46-47页 |
| 4.15 过表达Rv2816c基因降低耻垢分枝杆菌在巨噬细胞中的存活率 | 第47-48页 |
| 4.16 Rv2816c基因的表达降低了耻垢分枝杆菌诱导的THP-1细胞因子的分泌 | 第48-51页 |
| 第5章 结论与展望 | 第51-53页 |
| 5.1 实验结论与分析 | 第51-52页 |
| 5.2 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 在学校期间所发表的文章 | 第63页 |
