| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-13页 |
| Abstract | 第13-21页 |
| 目次 | 第22-26页 |
| 绪论 | 第26-30页 |
| 第一部分 阿霉素影响骨肉瘤肿瘤干细胞特性及转移能力的作用及机制研究 | 第30-56页 |
| 1.1 引言 | 第30-32页 |
| 1.2 实验材料与仪器 | 第32-35页 |
| 1.2.1 细胞株和病人原代样本 | 第32页 |
| 1.2.2 质粒 | 第32页 |
| 1.2.3 药物与主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.2.5 实验仪器与主要材料 | 第33-35页 |
| 1.3 实验方法 | 第35-42页 |
| 1.3.1 细胞培养 | 第35页 |
| 1.3.2 SRB法检测 | 第35页 |
| 1.3.3 流式细胞术检测骨肉瘤细胞表面抗原CD133表达情况 | 第35-36页 |
| 1.3.4 干细胞球的培养 | 第36页 |
| 1.3.5 Real-time PCR测定细胞相关基因表达水平的变化 | 第36-37页 |
| 1.3.6 细胞划痕修复实验 | 第37-38页 |
| 1.3.7 Transwell小室细胞迁移实验 | 第38页 |
| 1.3.8 Western Blotting检测相关蛋白表达水平 | 第38-40页 |
| 1.3.9 SiRNA技术沉默骨肉瘤KHOS/NP细胞的Klf-4 | 第40页 |
| 1.3.10 慢病毒的包装、滴度测定及靶细胞转染 | 第40-41页 |
| 1.3.11 数据分析 | 第41-42页 |
| 1.4 实验结果 | 第42-54页 |
| 1.4.1 ADR对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响 | 第42-45页 |
| 1.4.2 ADR对骨肉瘤细胞转移能力的影响 | 第45-46页 |
| 1.4.3 ADR对干细胞转录因子的影响 | 第46-49页 |
| 1.4.4 Klf-4对ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响 | 第49-52页 |
| 1.4.5 Klf-4对ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力的影响 | 第52-54页 |
| 1.5 讨论 | 第54-56页 |
| 第二部分 Klf-4调控骨肉瘤脾瘤干细胞特性及转移能力的作用研究 | 第56-104页 |
| 2.1 引言 | 第56-59页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第59-63页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第59页 |
| 2.2.2 质粒 | 第59页 |
| 2.2.3 药物与主要试剂 | 第59-62页 |
| 2.2.4 实验动物 | 第62页 |
| 2.2.5 实验仪器及主要材料 | 第62-63页 |
| 2.3 实验方法 | 第63-73页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第63页 |
| 2.3.2 台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性 | 第63页 |
| 2.3.3 干细胞球的培养 | 第63页 |
| 2.3.4 细胞周期和凋亡检测 | 第63-64页 |
| 2.3.5 细胞划痕修复实验 | 第64页 |
| 2.3.6 Transwell小室细胞迁移实验 | 第64页 |
| 2.3.7 Western Blotting检测相关蛋白表达水平 | 第64-66页 |
| 2.3.8 SRB法检测 | 第66页 |
| 2.3.9 qRT-PCR测定相关基因表达水平的变化 | 第66-68页 |
| 2.3.10 质粒转化 | 第68-69页 |
| 2.3.11 慢病毒的包装、滴度测定及靶细胞转染 | 第69-70页 |
| 2.3.12 SiRNA技术沉默骨肉瘤KHOS/NP细胞的Klf-4和p38 | 第70-71页 |
| 2.3.13 软琼脂糖克隆形成实验 | 第71页 |
| 2.3.14 裸小鼠异位移植瘤模型评价骨肉瘤细胞成瘤能力 | 第71页 |
| 2.3.15 基因芯片分析 | 第71-72页 |
| 2.3.16 数据分析 | 第72-73页 |
| 2.4 实验结果 | 第73-100页 |
| 2.4.1 Klf-4在不同骨肉瘤细胞中的表达情况 | 第73-76页 |
| 2.4.2 Klf-4的蛋白对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响 | 第76-84页 |
| 2.4.3 Klf-4的蛋白对骨肉瘤细胞周期和增殖能力的影响 | 第84-86页 |
| 2.4.4 Klf-4的蛋白对骨肉瘤细胞化疗敏感性的影响 | 第86-90页 |
| 2.4.5 Klf-4的蛋白表达对骨肉瘤细胞转移能力的影响 | 第90-95页 |
| 2.4.6 p38 MAPK信号通路对Klf-4调控的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响 | 第95-100页 |
| 2.5 讨论 | 第100-104页 |
| 第三部分 辛伐他汀通过抑制Klf-4蛋白拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性 | 第104-121页 |
| 3.1 引言 | 第104-105页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第105-106页 |
| 3.2.1 细胞株 | 第105页 |
| 3.2.2 质粒 | 第105页 |
| 3.2.3 药物与主要试剂 | 第105页 |
| 3.2.4 实验动物 | 第105-106页 |
| 3.2.5 实验仪器与主要材料 | 第106页 |
| 3.3 实验方法 | 第106-110页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第106页 |
| 3.3.2 流式细胞术检测骨肉瘤细胞表面抗原CD133表达情况 | 第106页 |
| 3.3.3 干细胞球培养 | 第106页 |
| 3.3.4 Real-time PCR测定细胞相关基因表达水平的变化 | 第106页 |
| 3.3.5 细胞划痕修复实验 | 第106页 |
| 3.3.6 Transwell小室细胞迁移实验 | 第106-107页 |
| 3.3.7 Western Blotting检测相关蛋白表达水平 | 第107页 |
| 3.3.8 慢病毒包装、滴度测定及靶细胞转染 | 第107页 |
| 3.3.9 裸小鼠异位移植瘤模型评价骨肉瘤细胞成瘤能力 | 第107-108页 |
| 3.3.10 免疫组化 | 第108-109页 |
| 3.3.11 移植瘤的免疫荧光染色 | 第109页 |
| 3.3.12 数据分析 | 第109-110页 |
| 3.4 实验结果 | 第110-119页 |
| 3.4.1 他汀类药物可以抑制Klf-4蛋白进而影响细胞sphere形成能力 | 第110-111页 |
| 3.4.2 辛伐他汀药物可以拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性 | 第111-114页 |
| 3.4.3 辛伐他汀药物可以拮抗ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力 | 第114-115页 |
| 3.4.4 辛伐他汀通过抑制Klf-4拮抗ADR所促进的骨肉瘤细胞成瘤性 | 第115-119页 |
| 3.5 讨论 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-131页 |
| 综述 肿瘤干细胞研究进展 | 第131-147页 |
| 参考文献 | 第139-147页 |
| 作者简历及在学期间所获得的科研成果 | 第147-148页 |
