| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 银杏简介 | 第10页 |
| 1.1.1 银杏概述 | 第10页 |
| 1.1.2 银杏基因工程应用研究 | 第10页 |
| 1.2 银杏黄酮类化合物 | 第10-14页 |
| 1.2.1 银杏叶黄酮类化合物成分 | 第10-11页 |
| 1.2.2 银杏黄酮类化合物的作用 | 第11页 |
| 1.2.3 银杏黄酮类化合物生物合成代谢途径 | 第11-13页 |
| 1.2.4 环境因素对银杏黄酮合成的影响 | 第13-14页 |
| 1.3 植物MYB转录因子研究 | 第14-17页 |
| 1.3.1 植物MYB转录因子的特征与分类 | 第14-15页 |
| 1.3.2 植物MYB转录因子的起源与进化 | 第15页 |
| 1.3.3 植物MYB转录因子的功能 | 第15-17页 |
| 1.4 目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题研究的主要内容及目标 | 第18-19页 |
| 1.5.1 研究目标 | 第18页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 银杏MYB转录因子基因的克隆 | 第19-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌种 | 第19页 |
| 2.1.3 载体 | 第19页 |
| 2.1.4 酶与试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 其他试剂 | 第19页 |
| 2.1.6 溶液 | 第19页 |
| 2.1.7 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.8 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 银杏叶总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 总RNA的检测及纯化 | 第21页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.2.4 银杏MYB基因两端序列的扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.5 银杏MYB基因的 3' RACE克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.6 银杏MYB基因的 5' RACE克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.7 目的片段的凝胶回收和纯化 | 第26页 |
| 2.2.8 目的片段与克隆载体的连接 | 第26-27页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第27页 |
| 2.2.10 阳性克隆菌株的筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.11 银杏MYB基因全长cDNA的扩增 | 第28-29页 |
| 2.3 试验结果 | 第29-33页 |
| 2.3.1 银杏叶总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.2 MYB基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.3.3 银杏叶MYB基因全长cDNA全长序列的获得 | 第30页 |
| 2.3.4 银杏叶MYB基因全长cDNA序列 | 第30页 |
| 2.3.5 银杏MYB基因的OFR分析 | 第30-31页 |
| 2.3.6 银杏MYB基因的BLAST比对分析 | 第31-32页 |
| 2.3.7 银杏MYB基因氨基酸序列的分析 | 第32-33页 |
| 2.3.8 银杏MYB基因的进化树分析 | 第33页 |
| 2.4 结果讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 不同环境条件下银杏MYB基因定量表达分析 | 第35-40页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第35页 |
| 3.1.1 植物材料及其处理 | 第35页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 仪器 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 RNA提取、纯化及cDNA的合成 | 第35页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR引物设计 | 第35-36页 |
| 3.2.3 实时定量RT-PCR | 第36页 |
| 3.2.4 银杏叶总黄酮的的提取 | 第36页 |
| 3.2.5 银杏叶总黄酮的的测定 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 内参基因GAPDH的筛选 | 第37页 |
| 3.3.2 银杏MYB基因在不同环境胁迫处理的表达分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 银杏不同胁迫处理后总黄酮的检测 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 银杏MYB基因的表达载体构建及遗传转化 | 第40-48页 |
| 4.1 试验材料 | 第40页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第40页 |
| 4.1.2 菌株及载体 | 第40页 |
| 4.2 试验方法 | 第40-46页 |
| 4.2.1 银杏MYB基因gateway表达载体的构建 | 第40-44页 |
| 4.2.2 农杆菌介导的遗传转化 | 第44-45页 |
| 4.2.3 转基因拟南芥植株的阳性筛选 | 第45-46页 |
| 4.3 结果分析 | 第46-47页 |
| 4.3.1 银杏MYB基因与TOPO载体入门克隆阳性重组子检测 | 第46页 |
| 4.3.2 银杏MYB基因表达载体阳性重组子检测 | 第46页 |
| 4.3.3 转基因拟南芥的初步检测 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 GBMYB1、GBMYB2和GBMYB3基因在拟南芥中的表达及相关功能分析 | 第48-52页 |
| 5.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.2 试验方法 | 第48-49页 |
| 5.2.1 T3代纯合转基因拟南芥植株的获得 | 第48页 |
| 5.2.2 转基因植株表型的观察 | 第48-49页 |
| 5.3 结果与分析 | 第49-51页 |
| 5.3.1 T3代转基因纯合植株株高表型的观察 | 第49-50页 |
| 5.3.2 转基因拟南芥对非生物胁迫的抗性分析 | 第50-51页 |
| 5.4 结果分析 | 第51-52页 |
| 第六章 结论与展望 | 第52-54页 |
| 6.1 主要结论 | 第52页 |
| 6.2 展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附表 | 第58-61页 |
